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流式细胞法检测免疫信号转导和表型靶标的实验步骤兼容性表

本实验步骤兼容性表标识了与通用实验步骤协作的表面和细胞内抗体。在页面底部的文本中找到有关内容和导航表格的其他详细信息。

抗体克隆信息和实验步骤兼容性测试

 
抗体克隆信息 实验步骤兼容测试 可用偶联物
(荧光素名称上方列出发射光谱(nm))
 
  紫色激光 蓝色激光 红色激光
  实验步骤 450 455 520 520 578 667 678 695 785 660 668 710 719 785
抗体
表位
位置
物种
反应性
Violet Fluor™ 450 Pacific Blue™ FITC Alexa Fluor® 488 PE PE-Cy®5 PerCP PerCP-Cy®5.5 PE-Cy®7 APC Alexa Fluor® 647 red Fluor™ 710 Alexa Fluor® 700/th> APC-Cy®7
Aiolos (D1C1E) IC H, M 不建议 建议 建议 不建议       94568 21799           10896   59612  
Phospho-Akt
(Thr308) (D25E6)
IC H、M、R、Mk 不建议 建议 建议 未测试       43506 13842           48646      
BCL6 (D4I2V) IC H 不建议 建议 建议 未测试       26556 84882           41194      
Bcl-xL (54H6) IC H、M、R、Mk 不建议 建议 建议 建议       2767 13835       81965 12099 86387      
Cleaved Caspase-3
(Asp175) (D3E9)
IC H, M 不建议 建议 建议 建议   8788   9603 12768           9602      
CD3 (17A2) EC M 建议 性能下降 建议 建议 38527   86603   28306         24265   26582   17857
CD3 (UCHT1) EC H 建议 建议 建议 建议 61347   86774   46233     31767 62670 19881   44330   72359
CD4 (RM4-5) EC M 建议 建议 建议 建议 92599   96127   26589     49482 38341 82116   75508   46328
CD4 (RPA-T4) EC H 建议 建议 建议 建议 26755   48705   55927     46699 66182 78292       94467
CD8α (2.43) EC M 建议 性能下降 建议 建议 17083   35467   56984     72461 87922 64786        
CD8α (RPA-T8) EC H 建议 不建议 建议 建议 25109   55397   88829     75003 27442 64915   86135   26030
CD11b/ITGAM (M1/70) EC H, M 建议 建议 建议 建议 70078   24442   24965 16538   85601   41249   55274   81222
CD11c (3.9) EC H 性能下降 不建议 不建议 建议 97473   69627   56025       80342 36268   42847   51562
CD14 (61D3) EC H 建议 建议 建议 建议 82944   29943   59896     99811 44947 36377   64342    
CD16 (3G8) EC H 建议 不建议 建议 建议         82004       23290          
CD19 (1D3) EC M 建议 不建议 不建议 性能下降 54508   53343   82168     43145 27221 39831   72880    
CD19 (SJ25C1) EC H 建议 不建议 性能下降 建议     49255   60751   47432   78813 31943        
CD19(细胞内结构域)
(D4V4B)
IC H, M 不建议 建议 建议 未测试       70418 58960           16344      
CD20 (2H7) EC H 建议 不建议 不建议 建议 88560   87491   26137     72374 50665 69077   38268   78944
CD24 (M1/69) EC M 建议 不建议 不建议 性能下降 9705       90378         68390        
CD25/IL2-Rα (BC96) EC H 性能下降 不建议 不建议 不建议                 43212 20164        
CD27 (O323) EC H 建议 不建议 不建议 性能下降 70511   35379   55584       66120 42404       19805
CD28 (CD28.2) EC H 建议 不建议 不建议 不建议     15666   27826     25544 82076 73906        
CD38 (HIT2) EC H 建议 不建议 不建议 不建议 24713   90005   90775     10284   73977        
CD44 (IM7) EC H, M 建议 建议 建议 建议 53289   75122   88151 94170   38200 43675 80813   63882   86109
CD45 (30-F11) EC M 建议 建议 建议 建议 83090   62307   47742       60943 41104   99856    
CD45 (HI30) EC H 建议 建议 建议 建议 74292   86532   89492     32125 28418 98228   39170   77322
CD45RA (HI100) EC H 建议 性能下降 性能下降 性能下降 72177   23672   96979     78564 37558 97321       37674
CD45R/B220
(RA3-6B2)
EC H, M 建议 建议 建议 建议 67084   34399   93992 16935   17299 82922 98126   82984   31953
CD56/NCAM1 (MY31) EC H 建议 不建议 不建议 性能下降     67184   73521       42804 51997        
CD62L/L-Selectin
(MEL-14)
EC M 建议 不建议 不建议 性能下降     76378   32908     90088 61885 46592   60310   18118
Phospho-CD79A
(Tyr182) (D1B9)
IC H 不建议 建议 建议 未测试       52821 14948           29742      
CD68 (D4B9C) EC H 性能下降 建议 建议 建议       24850 79594                  
CD86/B7-2 (GL-1) EC M 建议 性能下降 性能下降 建议     99879   60712       11527 84393        
CD161/NK1.1 (PK136) EC M 建议 不建议 建议 建议     28486   45378     88957 78652 35986   19809    
CD161/KLRB1
(HP-3G10)
EC H 性能下降 不建议 不建议 不建议 26540   67086   83130     26217   51113        
Phospho-CREB
(Ser133) (87G3)
IC H, M, R 不建议 建议 建议 未测试       9187 14228           14001      
CTLA-4 (D4E9I) EC H 建议 性能下降 性能下降 未测试       15162 15132                  
EOMES (D8D1R) IC H 不建议 建议 建议 建议         17984           42582      
FoxP3 (3G3) IC M 不建议 不建议 不建议 建议         65210       10680 41442        
F4/80 (BM8.1) EC M 建议 性能下降 建议 未测试 40781   52267   64763     88154 80380 86007   94009   19233
GATA-3 (D13C9) IC H, M 不建议 建议 建议 未测试         13411                  
Granzyme B (D2H2F) IC H, M 不建议 建议 建议 建议       33359 65563           50590      
Helios (D8W4X) IC H, M 不建议 建议 未测试 不建议       56424 29360           65432      
Phospho-Histone H2A.X
(Ser139) (20E3)
IC H、M、R、Mk 不建议 建议 建议 未测试       9719 5763           9720      
Histone H3 (D1H2) IC H、M、R、Mk 不建议 建议 性能下降 未测试   12167     82241           12230      
Phospho-Histone H3
(Ser10) (D2C8)
IC H, M, R, Mk, Z 不建议 建议 建议 性能下降   8552   3465 5764           3458      
Acetyl-Histone H3
(Lys9) (C5B11)
IC H, M, R, Mk, Z 不建议 建议 建议 未测试   11857   9683 28036           4484      
Tri-Methyl-Histone H3
(Lys27) (C36B11)
IC H、M、R、Mk 不建议 建议 建议 未测试       5499 40724           12158      
Tri-Methyl-Histone H3
(Lys36) (D5A7)
IC H、M、R、Mk 不建议 建议 不建议 未测试         46287                  
Tri-Methyl-Histone H3
(Lys4) (C42D8)
IC H, M, R, Mk, Dm, Sc 不建议 建议 建议 未测试                     12064      
HLA-DR (L243) EC H 建议 建议 建议 不建议     54126   78397   17634         46861   92482
Ikaros (D6N9Y) IC H, M 不建议 建议 建议 不建议       89389 33462           15740      
IκBα (L35A5) IC H, M, R, Mk, B, Pg 不建议 建议 建议 未测试   13656   5743 7523                  
IL-2 (JES6-5H4) IC M 不建议 性能下降 建议 不建议         87412         74445        
Phospho-IRF-3
(Ser396) (D6O1M)
IC H, M, R 不建议 建议 不建议 未测试       53539 83611                  
MHC Class II (I-A/I-E)
(M5/114.15.2)
EC M 建议 建议 建议 建议 86628   42594   67762     16114   64776   29097   55413
Phospho-NF-kB p65
(Ser536) (93H1)
IC H, M, R, Hm, Mk, Pg 不建议 建议 建议 不建议       4886 5733           4887      
Nur77 (D63C5) IC H 不建议 建议 建议 未测试         59999                  
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2)
(Thr202/Tyr204) (197G2)
IC H, M, R, Mk, Mi, Dm, Z, Pg 不建议 建议 建议 未测试   14196   13214 14095       98168 33370 13148   15892  
Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) IC H、Mk 不建议 建议 建议 建议       9148 8978           6987      
Phospho-PLCγ1
(Tyr783) (D6M9S)
IC H, M 不建议 建议 未测试 未测试       25678 14461           88717      
Phospho-S6 Ribosomal Protein
(Ser235/236) (D57.2.2E)
IC H, M, R, Mk, Mi, Sc 不建议 建议 建议 未测试   8520   4803 5316       34411 14733 4851   27036  
Phospho-SLP-76
(Ser376) (D7S1K)
IC H 不建议 建议 不建议 未测试   83768   90247 16318           40887      
Phospho-Stat1
(Tyr701) (58D6)
IC H, M 不建议 建议 不建议 不建议       9174 8062           8009      
Phospho-Stat2
(Tyr690) (D3P2P)
IC H, R 不建议 建议 不建议 不建议       68826 77366           90740      
Phospho-Stat3
(Tyr705) (D3A7)
IC H、M、R、Mk 不建议 建议 不建议 不建议       4323 8119           4324      
Phospho-Stat3
(Ser727) (D4X3C)
IC H 不建议 建议 不建议 不建议       58978 87544           71958      
Phospho-Stat4
(Tyr693) (D2E4)
IC H 不建议 建议 不建议 不建议         13223                  
Phospho-Stat5
(Tyr694) (C71E5)
IC H, M 不建议 建议 不建议 不建议       3939 5387           9365      
Phospho-Stat5
(Tyr694) (D47E7)
IC H, M 不建议 建议 不建议 不建议         14603                  
Phospho-Stat6
(Tyr641) (D8S9Y)
IC H, M 不建议 建议 不建议 不建议         99902           10205      
Phospho-STING
(Ser365) (D1C4T)
IC M 不建议 建议 建议 未测试                            
Phospho-STING
(Ser366) (D8K6H)
IC H 不建议 建议 建议 未测试       41622             43499      
Phospho-Syk
(Tyr525/526) (C87C1)
IC H 不建议 建议 建议 未测试       4349 6485           12081      
Phospho-TBK1/NAK
(Ser172) (D52C2)
IC H, M 不建议 建议 建议 未测试       14586 13498           14590      
T-bet/TBX21 (D6N8B) IC H 不建议 建议 建议 未测试       14298             14307      
TCF1/TCF7 (C63D9) IC H, M 不建议 建议 建议 建议   9066   6444 14456           6709      
TNF-α (D2D4) IC M 不建议 建议 建议 建议       87509                    
Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk
(Tyr352) (65E4)
IC H, M 不建议 建议 未测试 未测试       73382 14791           82975      
Phospho-4E-BP1
(Thr37/46) (236B4)
IC H, M, R, Mk, Dm 不建议 建议 建议 未测试       2846 7547           5123      

表格关键信息:   IC: 细胞内 EC:胞外 建议建议 性能下降 性能降低 不建议不建议 未测试未测试

物种反应性键:H—人类 M— 小鼠 R—大鼠 MK—猴子 B— 牛 PG—猪 Mi—水貂 DM—黑腹果蝇 Z—斑马鱼 SC—酿酒酵母

实验步骤概述

实验步骤编号 实验步骤信息 染色制备简介 可用的固定透化试剂盒
1 活细胞表面染色实验步骤 染色前无细胞固定或透化的实验步骤 不适用
2 固定细胞内染色 – 甲醇透化实验步骤 在染色前使用甲醛和甲醇固定和透化细胞 13593
3 固定细胞内染色 – TRITON™ X-100 透化实验步骤 在染色前使用甲醛和 TRITON™ X-100 进行细胞固定和透化 51995
4 固定细胞内染色 – FOXP3/转录因子实验步骤 针对转录因子和核蛋白抗体染色的固定和透化缓冲液组 43481

流式细胞仪 - 用于建立多色组合的抗体和实验步骤选择指南

在流式细胞仪实验中染色活细胞或固定细胞时,您可以选择很多不同的实验步骤。您的实验步骤必须与用于细胞染色的抗体兼容,以避免对表位识别产生负面影响,同时仍允许抗体进入所感兴趣的蛋白所在的细胞组分。

例如,磷酸化流式细胞实验中的细胞内靶标染色要求您在染色前固定并透化细胞。但是,固定 (FIX) 和透化 (PERM) 实验步骤可改变表位与抗体之间的相互作用。通透剂的选择对于检测中使用的抗体的敏感性、特异性和功能尤其具有显著影响。这可能取决于抗原和克隆。

通常使用甲醇等溶剂或 Triton™ X-100 或皂素等去垢剂实现通透。使用皂素进行的通透最不彻底;它通过结合胆固醇在质膜中形成孔道,但不会通透胞内膜结构,例如核膜或线粒体膜。Triton™ X-100 和甲醇能够充分通透大多数胞内膜,从而提供最彻底的通透。然而,甲醇可能会破坏表位,一些抗体(包括一些表面标记物)在进行甲醇通透后不起作用。

本实验步骤兼容性表标识了与通用实验步骤协作的表面和细胞内抗体

Cell Signaling Technology® (CST) 提供与不同荧光染料偶联的经流式细胞仪验证的抗体的多样化目录。我们已将此通过流式细胞仪的免疫信号转导和表型的实验步骤兼容性表整合在一起,以帮助您快速识别 CST 目录中哪些染色实验步骤和抗体兼容,尤其是在选择多个抗体,在多重组合中用于信号流式细胞仪时。特别的是,该表将帮助您理解:

  • 哪种表面标记抗体(CD 标记)仅与活细胞实验步骤兼容
  • 哪些 CD 标记在通常用于细胞内染色流式细胞仪的固定-透化实验步骤中有效
  • 哪些固定-透化 (fix-perm) 实验步骤与 fix-perm 兼容抗体配合使用
  • 哪些抗体只能与 fix-perm 实验步骤,以及哪些实验步骤配合使用

浏览实验步骤兼容性表

抗体克隆信息列出 CST 抗体克隆、表位位置以及用于实验潜在抗体的物种反应性信息。

实验步骤兼容性测试确定每个抗体克隆测试了哪些最常用的实验步骤,以帮助您节省配伍组合的时间。在实验中选择多路复用抗体时,您将要确保每个克隆都与同一实验步骤兼容。绿色标记表示建议使用实验步骤,黄色标记表示实验步骤已经过测试,但可能性能下降,因此建议进一步的实验步骤优化,红色标志表示该抗体不建议用于特定实验步骤,白色标记表示尚未测试实验步骤。

可用偶联物列出了每个克隆可从 CST 获得的偶联抗体产品,从左到右按照相应荧光基团的大最大发射光进行排序。点击产品货号链接,了解有关重要特定抗体偶联物的更多信息。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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