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3569
CD34 (ICO115) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体

CD34 (ICO115) Mouse mAb #3569

引用 (25)
筛选器:
  1. IHC
  2. F
Immunohistochemistry Image 1: CD34 (ICO115) Mouse mAb
使用 CD34 (ICO115) Mouse mAb,对石蜡包埋的人毛细血管血管瘤进行免疫组织化学分析。
Flow Cytometry Image 1: CD34 (ICO115) Mouse mAb
以浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5414(左图)作为对照,使用 CD34 (ICO-115) Mouse mAb(右图)对掺入 CD34 阳性 Stem-TrolStem-Trol对照细胞(贝克曼库尔特)的活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。抗-小鼠 IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 偶联物) 用作二抗。
To Purchase # 3569S
产品货号 规格 价格 库存
3569S
100 µl

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa) 110
来源/亚型 小鼠 IgG1

应用缩写:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学(石蜡) 1:50
流式细胞术 1:200 - 1:400

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

实验步骤

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免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液和试剂

  1. 二甲苯
  2. 乙醇,无水变性,组织学分级(100% 和 95%)
  3. 去离子水 (dH2O)
  4. Hematoxylin(可选)
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
    2. 抗体稀释剂 TBST/5% Normal Goat Serum:向 5 mL 1X TBST 中添加 250 µl Normal Goat Serum #5425)。
  6. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  7. 3% 过氧化氢:要制备,添加10 ml 30% H2O2至90 ml dH2O 中。
  8. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  9. 检测系统: VECTASTAIN® Elite ABC,包括生物素化二抗 (Vector Laboratories)。
  10. 底物:Vector® NovaRED™ (Vector Laboratories)。
  11. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  12. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3% 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 在每个切片上滴加 100–400 µl 首选封闭液,在室温下封闭 1 小时。
  6. 清除封闭液,然后每个切片加入用推荐的抗体稀释剂稀释的 100–400 µl 的一抗。4°C 温度下孵育过夜
  7. 根据制造商建议说明制备 ABC 溶液。
  8. 清除一抗,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 将每个切片中添加 100-400 µl 生物素化二抗(根据制造商建议在 TBST 中进行稀释)。在室温孵育 30 分钟。
  10. 清除二抗溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 按需使用 100-400 µl 预混合 ABC 溶液覆盖切片,并在湿盒中室温孵育 30 分钟。
  12. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  13. 根据制造商建议说明制备 Vector® NovaRED™。
  14. 在每张切片上应用 100–400 µl 底物并密切观察,通常 1-10 分钟即可得到合适的染色强度。
  15. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  16. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  17. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  18. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

发布​于 2005 年 6 月 

修订于 2016 年 3 月

实验步骤编号:295

针对非偶联小鼠抗体的活细胞实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS):要制备 1 L 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。
  3. 建议使用 Anti-Mouse 二抗
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8890
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4410
    • Anti-Mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (PE Conjugate) #59997

注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注意:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 100 µl 稀释的荧光物质偶联的二抗(按建议稀释度用抗体稀释缓冲液制备)中重悬细胞。
  7. 在冰上孵育 30 分钟。避光保存。
  8. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  9. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​于 2011 年 2 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:58

特异性/敏感性

CD34 (ICO115) Mouse mAb 可检测 CD34 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

通过使用慢性髓细胞性白血病患者的原始细胞对 BALB/c 小鼠进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD34 是由造血干细胞/祖细胞、血管内皮和一些成纤维细胞表达的 I 型跨膜糖化磷酸蛋白 (1)。CD34 表达多年来用作鉴定造血干细胞的标志。CD34+ 造血干细胞在细胞因子或生长因子刺激时,扩增并分化成各种淋巴造血谱系,并在分化时丧失 CD34 表达。但是,在不同实验室中进行的最近研究与该常规矛盾 (2)。CD34 的胞外结构域与 CD43 (一种涉及细胞间黏附的蛋白质)同源,并且已经证实 CD34 作为细胞黏附的负调节分子发挥作用 (3)。CD34 与 CrkL 结合,但不与 CrkII 结合,CrkII 是 PKC 的底物,并且 PKC 的激活与 CD34 的表面表达偶联 (1,4)。
  1. Felschow, D. M. et al. (2001) Blood 97, 3768-3775.
  2. Sato, T. et al. (1999) Blood 94, 2548-2554.
  3. Drew, E. et al. (2005) Immunity 22, 43-57.
  4. Fackler, M. J. et al. (1992) J. Biol. Chem. 267, 17540-17546.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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