流式细胞术活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

注：利用反渗透去离子 (RODI) 水或同等级别的水制备溶液。

1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS，添加 100 mL 10X PBS #12528 至 900 mL 水中。混匀。
2. 抗体稀释缓冲液：购买即用型 Flow Cytometry Antibody Dilution Buffer #9998，溶入 100 mL 1X PBS 中。保存在 4°C 下。
3. 推荐的二抗：对于未偶联抗体的检测， 请选择与您的一抗（例如兔） 的宿主物种匹配的二抗。 点击此处获取已经过 流式细胞术验证的二抗的最新列表。

注：在您的实验中加入荧光细胞染料 （包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品页 ，了解建议的实验步骤。访问我们的网站， 了解经流式细胞术验证的细胞染料列表。

B. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或其他方法 计数细胞。

注：如果使用全血，则需在免疫染色之前裂解红细胞并通过离心 来洗涤。

注：为了防止与 Fc 受体的脱靶结合， 在免疫染色之前，用 Fc 阻断缓冲液预孵育活细胞。

注：最佳的离心条件根据细胞类型和试剂体积 有所不同。一般，以 150-300 g 离心 1-5 分钟将 足以使细胞沉淀。

1. 将所需数目的细胞分装入试管或孔板中。（通常，每次测定使用 5 x 10⁵ 至 1 x 10⁶ 个细胞。）
2. 通过离心使细胞沉淀下来，移除上清液。
3. 在 100 µL 稀释的一抗中重悬细胞， 这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液制备 。
4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去 上清液。重复。如果使用直接偶联抗体，则跳到步骤 9。
6. 在 100 µL 稀释的荧光素偶联的二抗中重悬细胞， 这种二抗按建议的稀释比例以抗体稀释缓冲液制备 。
7. 在冰上孵育 30 分钟。避光。
8. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。弃去 上清液。重复。
9. 在 200-500 µL 抗体稀释缓冲液中重悬细胞， 然后在流式细胞分析仪上进行分析。

如有任何问题，请联系我们。

_{仅供研究使用。不得用于诊断流程。}