SignalStar^™ 空间分析

CST 的 SignalStar Multiplex IHC 是空间生物学研究的革命性新工具，可提供完全灵活且经过高度验证的抗体检测板。

SignalStar 技术可在 FFPE 组织中同时扩增多种生物标记物，具有高灵敏度和特异性。仅仅 2 天，即可就最多 8 个靶标生成准确、可靠的数据。

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什么是 SignalStar Multiplex IHC？

SignalStar Multiplex IHC 是一种采用抗体、寡核苷酸和荧光团探究细胞存在情况、位置、功能和生物标记物共表达模式的技术。SignalStar 测定法能够检测多个表型和功能靶标，同时维持空间背景和组织结构。这些洞见对了解细胞如何组织并相互作用以影响组织微环境及推动疾病进展和对治疗作出反应至关重要。

为什么选择 Multiplex IHC？

Multiplex IHC (mIHC) 是一款强大的多功能工具，可用于回答各种研究问题。无论您是需要了解靶标和细胞的原生状态、最大限度地获取数据、了解细胞功能，还是仅仅因为 RNA 信息不够而要检测蛋白质，Multiplex IHC 都是理想的解决方案。

了解原生状态下的生物学和功能

Multiplex IHC 能够在单个组织样品中同时检测多种蛋白质和修饰生物标记物，保持靶标的原始空间和细胞背景，并深入了解细胞和组织的潜在功能。

最大限度地获取数据

Multiplex IHC 可让您最大限度地增加从单个样品中获取的数据量，从而减少对额外组织样品的需求。

更好的翻译后洞察力

虽然 RNA 分析可以提供有关基因表达的信息，但它无法捕获翻译后蛋白质修饰，例如磷酸化、糖基化和乙酰化。Multiplex IHC 可以同时检测多种蛋白质修饰，从而更全面地了解基础生物学。

SignalStar Multiplex IHC 的工作原理

图解： SignalStar 测定法可同时检测福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组织中多达 8 个靶标。对脱蜡、再水化的 FFPE 组织切片进行抗原修复 (A)，将您所选像素尺寸（最多 3-8 种唯一寡核苷酸偶联抗体）下的所有抗体在一个第一孵育步骤中添加 (B)。带荧光染料（信道：488、594、647、750 nm）的互补性寡核苷酸通过在抗体之外构建大的寡核苷酸分支结构 (C-D)，从而在第一轮成像中放大多达 4 种寡核苷酸偶联抗体的信号。如果像素尺寸大于 4，则柔和移除第一轮的寡核苷酸和荧光团 (E)，接着添加第二轮以放大多达 4 种额外的寡核苷酸偶联抗体的信号 (F)。然后将 2 幅图像用专有或开源软件以计算方式对齐，以生成多达 8 重的完整图像 (G)。

组织制备

组织的收集和固定至关重要，因为这直接影响样品的完整性和实验结果。影响组织的收集、保存和固定方法根据样品或关注靶标而变化
福尔马林等交联固定剂常用于制备多重 IHC 样品，因为它们会保留组织的结构完整性，有助于维持组织架构。

抗原修复

用于保持组织样品结构完整性的固定剂可能会隐藏您的抗体旨在识别的表位。
有几种方法可用来显示在固定过程中被隐藏的表位，包括蛋白水解诱导的抗原修复或热诱导的表位修复 (HIER)。

抗体孵育

从不断增加的抗体菜单中选择经过验证的抗体，这些抗体可以与我们通用的手动和自动实验步骤任意组合在一起。经过充分验证的实验步骤使您能够轻松地重新设计检测板，并让其即刻可用。
所有抗体均一次性添加，从而消除了抗体循环以及多轮成像期间表位降解或表位遮蔽的任何可能性。
使用 10% 中性缓冲福尔马林进行短暂的染色后固定可确保抗体在扩增和成像过程中保留在切片上。

寡核苷酸扩增

放大荧光信号，以检测广泛的动态靶标范围并使组织自发荧光更加明亮。
为前 4 个寡核苷酸偶联抗体添加每个抗体特异性的互补寡核苷酸，然后加入带有荧光团的其他寡核苷酸以指数级放大信号。
所使用的荧光团在光谱上是不同的，可减少光谱分解的需要。
轻轻去除含有荧光团的寡核苷酸，使抗体保持完整，从而能够进行第二轮扩增和成像。
将任何抗体与几乎任何荧光团配对，即刻就可进行您的实验！

SignalStar Multiplex IHC 优势

仅仅 2 天即可生成数据

其他多重技术的优化和验证可能需要数周到数月的时间。SignalStar 技术凭借优化的即用型检测板而无需这么长时间。从经过 IHC 验证的抗体菜单中选择靶标，这些抗体开箱即可在 FFPE 组织中发挥作用。

使用高灵敏度的测定法，自信地分析有限的珍贵 FFPE 组织样品，并且第一时间为您提供所需的信号。SignalStar 测定法使您能够在单个组织中放大多达 8 种蛋白质的荧光信号。

图解： 使用 Pan-Keratin (C11) & C0-0003-488 SignalStar Oligo-Antibody Pair #63566（红色）、PD-L1 (E1L3N) & C0-0005-488 SignalStar Oligo-Antibody Pair #85646（绿色）、PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) & C0-0008-594 SignalStar Oligo-Antibody Pair #35347（黄色）、Granzyme B (D6E9W) & C0-0009-594 SignalStar Oligo-Antibody Pair #15194（橙色）、TIGIT (E5Y1W) & C0-0002-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #18288（青色）、CD20 (E7B7T) & C0-0011-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #36775（粉红色）、CD3ε (D7A6E) Conjugate & C0-0001-750 SignalStar Oligo-Antibody Pair #51754（洋红色）、CD8ɑ (D8A8Y) & C0-0004-750 SignalStar Oligo-Antibody Pair #62750（白色）和 ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色），对石蜡包埋的人胃腺癌组织进行 SignalStar 多重免疫组织化学分析。包括具有代表性的单个和共同配准的 8 重图像。如图所示，所有荧光团都被指定为伪彩。在 Leica Biosystems 的 BOND RX 自动染色机上进行染色。

轻松地重新设计检测板

许多解决方案缺乏衍变的灵活性，无法适应不断变化的研究需求。SignalStar 检测板使您可以灵活地根据需求的变化轻松更改靶标并重新设计检测板。实验步骤经过验证和优化，即刻可用。

无论您在 SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 中设计的检测板如何，SignalStar 技术都能持续染色，并且检测板开箱即可使用。实验步骤还证明了跨越不同抗体组合、实验和成像仪器的可重现性。

图解：对组织微阵列内石蜡包埋的人甲状腺髓样癌组织进行 SignalStar 多重免疫组织化学分析。专题小组讨论 1：PD-L1 (E1L3N^®) & C0-0005-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #52085（黄色）、PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) & C0-0008-594 SignalStar Oligo-Antibody Pair #35347（未显示）、CD68 (D4B9C) & C0-0007-488 SignalStar Oligo-Antibody Pair #73071 （未显示）和 CD3ε (D7A6E) & C0-0001-750 SignalStar Oligo-Antibody Pair #51754（未显示）。专题小组讨论 2：PD-L1 (E1L3N) & C0-0005-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #52085（黄色）、PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) & C0-0008-594 SignalStar Oligo-Antibody Pair #35347（未显示）、CD68 (D4B9C) & C0-0007-488 SignalStar Oligo-Antibody Pair #73071（未显示）和 CD8 (D8A8Y) & C0-0004-750 SignalStar Oligo-Antibody Pair #62750（未显示）。专题小组讨论 3：PD-L1 (E1L3N) & C0-0005-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #52085（黄色）、PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) 和 C0-0008-594 SignalStar Oligo-Antibody Pair #35347（未显示）、Ki-67 (8D5) 和 C0-0014-488 SignalStar Oligo-Antibody Pair #89034（未显示）以及 CD8ɑ (D8A8Y) 和 C0-0004-750 SignalStar Oligo-Antibody Pair #62750（未显示）。如图所示，所有荧光团都被指定为伪彩。在 BOND RX 自动染色机上进行了染色。与使用 PD-L1 (E1L3N) & C0-0005-647 SignalStar Oligo Antibody Pair #52085（黄色）的单重 SignalStar 染色以及使用 PD-L1 (E1L3N) XP^® Rabbit mAb #13684 的显色染色相比较，在三个独特的 SignalStar 4 重检测板的序列切片中，在目标匹配区域中定量 PD-L1 阳性细胞的百分比。

放大信号

与许多其他解决方案不同，SignalStar 检测板提供放大功能。SignalStar 技术可放大靶标的信号，因此即使是低水平的表达也可以轻松检测到。比以往任何时候都能看到更多靶标，并检测到低表达水平的靶标。

图解： 与 PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) XP^® Rabbit mAb #86163（使用抗兔 IgG (H+L) 检测到）、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor^® 647 Conjugate) #4414 和 PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) XP^® Rabbit mAb (Alexa Fluor^® 647 Conjugate) 相比较，使用 PD-1 (Intracellular Domain) (D4W2J) & C0-0008-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #56837（红色）和 ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）对石蜡包埋的人扁桃体组织进行 SignalStar 多重免疫组织化学分析。所有荧光团都被分配了伪彩，如图所示。在 BOND RX 自动染色机上进行了染色。与间接和直接荧光方法相比，在 SignalStar 测定法的序列组织切片的匹配目的区域中定量 PD-1 阳性细胞的平均荧光强度。

每次均可重现

我们在 SignalStar 测定法中验证我们的抗体并保证它们按预期工作。每种 SignalStar 抗体均根据显色黄金标准进行验证，并且在重复实验中始终具有良好的可重现性。

我们的验证过程从 IHC-P 验证开始，然后是 SignalStar Multiplex IHC 的抗体验证。

图解： 使用 Pan-Keratin (C11) & C0-0003-488 SignalStar Oligo-Antibody Pair #63566（绿色）、PD-L1 (E1L3N^®) & C0-0005-594 SignalStar Oligo-Antibody Pair #28249（黄色）、CD20 (E7B7T) & C0-0011-647 SignalStar Oligo-Antibody Pair #36775（红色）和 CD8ɑ (D8A8Y) & C0-0004-750 SignalStar Oligo-Antibody Pair #62750（青色）对石蜡包埋的人结直肠腺癌组织进行 SignalStar 多重免疫组织化学分析。包含具有代表性的单个和 4 重图像。如图所示，所有荧光团都被指定为伪彩。在 BOND RX 自动染色机上进行了染色。与显色性相比，在 SignalStar 检测 (n=2) 的序列切片的目标匹配区域中定量阳性细胞的百分比。

使用现有仪器

具有不同发射峰值的稳定荧光信号使 SignalStar 检测板与您现有的成像仪器兼容。

使用与信道 488、594、647 和 750 nm 兼容的显微镜对切片进行成像，以处理 3-8 重检测。在 6 小时的实验步骤运行时间内，可以在 1 天内对 4 重进行染色和成像，或在 2 天内对 8 重进行染色和成像。自动化实验步骤可实现过夜染色，大大减少了手动操作时间。

结果值得信赖

SignalStar 检测板中使用的每种抗体都经过独立验证，可用于其预期应用，并保证像所有 CST^® 抗体一样发挥预期作用，从而在第一次以及每次检测时为您提供可靠、可重现的结果。您还可以利用市场上引用次数最多的抗体。

消除抗体循环

一次性添加所有抗体，无需担心表位丢失或遮蔽。

加快实验设计速度

我们易于使用的在线 SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 可为您完成设计工作，从而帮您节省时间。

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