产品包括 | 数量 | ||||
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BCA Protein Assay Reagent A | 250 ml | ||||
BCA Protein Assay Reagent B | 25 ml | ||||
BCA Protein Assay Albumin Standard | 10 单位 | ||||
Compatibility Reagent | 48 ea | ||||
Reconstitution Buffer | 15 ml |
产品信息
重要信息:当均于 1X 使用时,此 BCA Protein Assay Kit 兼容,已经过全面测试并批准与 Cell Lysis Buffer (10X) #9803、RIPA Buffer (10X) #9806 和 PathScan® Sandwich ELISA Lysis Buffer (1X) #7018一起使用。尚未在任何其他缓冲液上评估此测定的兼容性。
试剂盒内容:
需要附加材料:
使用与未知样品相同的缓冲液将一个白蛋白标准品 (BSA) 安瓿瓶的内容物稀释成几个微量离心管。使用下表作为指导以制备一组标准品(测定范围= 125-2,000 ug/ml)。
药瓶 | 稀释剂/样品缓冲液体积 (µl) | BSA 来源和体积 (µl) | 浓度 (µg/ml) |
A | 0 | 200 贮备液 | 2,000 |
B | 66 | 200 贮备液 | 1,500 |
C | 100 | 100 瓶 A | 1,000 |
D | 100 | 100 瓶 B | 750 |
E | 100 | 100 瓶 C | 500 |
F | 100 | 100 瓶 E | 250 |
注意:请勿丢弃任何未使用的、未稀释的 BSA 标准品 (2 mg/ml)。BSA 标准品可储存在 4 °C 微量离心管中,最长可达 2 周。切勿冷冻。
工作复溶缓冲液:
用 dH2O 以 1:1 稀释复溶缓冲液。如果蛋白质样品的 pH <6.0 或含有 EDTA 或咪唑,则不要稀释复溶缓冲液。
兼容性试剂溶液:
使用干净的移液器吸头穿刺覆盖在兼容性试剂管上的箔。添加 100 µl 工作复溶缓冲液进入试管中,通过搅拌试管底部和上下吹打 15-20 次来溶解。将此溶液于 4°C 避光储存 8 小时。可以将用过的微管切下并从未使用的微管中丢弃。将未使用的微管放回装有干燥剂包的小袋中。
注意:每个测定的样品需要 4 µl 兼容性试剂溶液。
BCA 工作试剂 (WR):
使用以下公式确定所需的 WR 总量:
(# 对照 + # 标准品 + # 未知样品)×(# 次重复样品)×(每个样品的 WR 体积)= 需要的 WR 总体积。
示例:三个未知样品和每个样品的两个重复样品:
(2 对照 + 7 标准品 + 3 未知物)× (2 重复样品)× (0.26 ml) = 6.24 需要 ml WR。
为制备 WR,混合 50 部分的 BCA 试剂 A 与 1 部分的 BCA 试剂 B(50:1,试剂 A:B)。6.24 ml WR = 6.12 ml 试剂 A + 0.12 ml 试剂 B
注意:当试剂 B 添加到试剂 A 时,溶液出现浑浊但混合时产生澄清的绿色 WR。
注意:精切移液至关重要。获得最佳结果,使用 1-10 µl 移液器。完全排出尖端的任何液体。移液时的小误差会导致测量吸光度时的大误差。
将样品直接添加到孔的中心,并避免接触孔的侧面。
在同一组样品中可以使用相同的吸头。添加兼容试剂溶液时,为每个样品使用不同的移液器。
如果蛋白质样品的 pH <5.0,则用复溶缓冲液以 1:1 稀释样品。
因为 BCA 测定未达到真正的终点,即使冷却到 RT,仍将继续显色。RT 下吸光度以每分钟 ~0.25% 速率增加。
注意:如果使用与酶标仪相关的曲线拟合算法,四参数(二次)曲线产生比线性曲线更准确的拟合。
发布时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:2104
二辛可宁酸 (BCA) 在碱性环境下能与亚铜离子 (Cu1+) 形成一种深紫色复合体。蛋白与碱性 Cu2+ 发生反应会产生 Cu1h+。由此产生的反应和颜色是能够检测各种蛋白浓度的常见蛋白定量方法的基础。蛋白浓度升高会使颜色按比例加深。与 Lowry 技术相比,BCA 蛋白测定法对常见干扰物质(如非离子去垢剂和缓冲盐)具有更高的抗干扰度 (1)。
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