Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
23978S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人
使用与人 SLP-76 蛋白中 Pro390 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
包含 SH2 结构域的 76 kDa 白细胞蛋白 (SLP-76) 是一种造血细胞接头蛋白,它对多个生化信号转导通路都非常重要,并且为 T 细胞发育和激活所必需 (1)。连接 TCR 会使 ZAP-70 磷酸化 SLP-76 和 LAT。SLP-76 的氨基末端酪氨酸残基后跟一个脯氨酸富集结构域和一个羧基末端 SH2 结构域。Tyr113 和 Tyr128 磷酸化会募集 GEF Vav 和接头蛋白 Nck (2)。连接 TCR 还会导致 Tyr145 磷酸化,从而介导 SLP-76 和 Itk 之间的结合,这在某种程度上通过 SLP-76 的脯氨酸富集结构域和 Itk 的 SH3 结构域完成 (3)。此外,SLP-76 的脯氨酸富集结构域结合类 Grb2 接头蛋白 Gads 的 SH3 结构域 (3,4)。在静息细胞中,SLP-76 主要在胞质中表达。在连接 TCR 后,SLP-76 转位到质膜,并促进多蛋白信号转导复合体的组装,该复合体包括 Vav、Nck、Itk 和 PLCγ1(1)。SLP-76 表达受严格调控;该蛋白在胸腺细胞发育的早期阶段可被检测到,随着胸腺细胞成熟过程的进行表达升高,并在细胞发育成成熟 CD4+ CD8+ 双阳性胸腺细胞的过程中表达降低 (5)。
探索与本品相关的通路。
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