产品使用信息
CST 建议转染 100 nM Beclin-1 siRNA I 48 至 72 小时后再进行细胞裂解。对于转染流程,请遵照转染试剂制造商提供的实验步骤。如有任何使用问题,请随时联系 CST。
每个小瓶含有相当于 100 次转染的用量,对应于每次转染时 24 孔板中的最终 siRNA 浓度(100 nM),每个孔的总量为 300 μl。
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SignalSilence® siRNA 保存在无 RNA 酶的水中。分装并保存在 -20ºC 下。
产品说明
Cell Signaling Technology (CST) 的 SignalSilence
® Beclin-1 siRNA I 能让研究人员使用 RNA 干扰特异性地抑制 Beclin-1 表达,这种方法通过将双链 RNA 分子递送到细胞内使基因表达选择性沉默。CST 的所有 SignalSilence
® siRNA 产品均已经过严格的内部测试,并且蛋白质印迹分析表明可降低靶蛋白表达。
质量控制
通过三苯甲基分析来逐个碱基地监视寡核苷酸合成,以确保合适的偶联效率。随后通过亲和固相萃取来纯化寡核苷酸。使用质谱分析法进一步分析退火的双链 RNA,从而验证双链的确切组分。使用质谱分析法将每个批次与上一批次进行对比,以最大程度确保批间一致性。
背景
自噬是自噬溶酶体降解蛋白质的一种分解代谢过程,由营养剥夺或神经退行性疾病引起 (1)。Beclin-1 是该过程中的关键蛋白之一,是哺乳动物中与酵母自噬蛋白 Apg6/Vps30 同源的基因 (2)。Beclin-1 可以补充由 Apg6 损失而造成的酵母自噬缺陷,在哺乳动物细胞中过表达时,可刺激细胞自噬 (3)。哺乳动物 Beclin-1 最初是从酵母双杂交筛选 Bcl-2 相互作用蛋白中分离出来,并且已经证明可以与 Bcl-2 和 Bcl-xL 相互作用,而不能与 Bax 或 Bak 相互作用 (4)。虽然 Beclin-1 一般普遍表达,但是研究发现在 40-75% 散发人乳腺癌和卵巢癌症中,其单等位基因缺失(5)。Beclin-1 主要位于胞浆结构中,包括线粒体,Beclin-1 过表达会引起核染色和 CRM1 依赖的出核转运 (6)。研究者发现 Beclin-1
-/- 小鼠在胚胎发育早期就会死亡,而 Beclin-1
-/+ 小鼠则有较高的自发肿瘤发病率。裸小鼠的干细胞的自噬反应改变,而对细胞凋亡的反应则正常 (7)。研究者还发现
在体内病毒感染神经元时,Beclin-1 过表达能针对 Sindbis 病毒诱导的疾病和神经元凋亡产生显著保护作用 (4)。
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Reggiori, F. and Klionsky, D.J. (2002) Eukaryot Cell 1, 11-21.
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Kametaka, S. et al. (1998) J Biol Chem 273, 22284-91.
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Yue, Z. et al. (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100, 15077-82.
通路与蛋白质
探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。
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