PTMScan^® Mono-Methyl Arginine Motif [mme-RG] Kit #12235

产品使用信息

细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解，细胞蛋白被蛋白酶消化，所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。肽段随后使用接合 protein A agarose beads 的 PTMScan^® Motif Antibody 进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽，捕获的包含 PTM 的肽用稀酸洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前，先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐，并将肽与抗体分离。CST 建议用试剂盒中包含的 PTMScan^® IAP Buffer #9993。该试剂盒还包含详细的实验步骤以及允许使用获专利的 PTMScan^® 方法的有限使用许可。

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抗体微珠以含 50% 甘油的 IAP 缓冲液提供。储存于 -20°C 的温度下。请不要分装抗体。

产品说明

PTMScan^® 技术采用 Cell Signaling Technology (CST) 的专有方法通过免疫沉淀实现肽富集，这种方法使用一种特殊微珠接合抗体以及液相色谱法 (LC)-质谱法 (MS/MS) 对细胞蛋白中的翻译后修饰 (PTM) 位点进行定量分析。这包括磷酸化 (PhosphoScan^®)、泛素化 (UbiScan^®)、乙酰化 (AcetylScan^®) 和甲基化 (MethylScan^®) 等等。PTMScan^® 技术能让研究人员分离、鉴定以及定量大量翻译后修饰的细胞肽，具有高特异性和灵敏度，从而可以全面了解细胞和组织样品中的 PTM，对这些修饰位点发生于何处不会具有偏好性 (1)。如需了解更多有关 PTMScan^® 蛋白质组服务的信息，请访问 www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=ptmscan-services。

背景

精氨酸甲基化是常见的翻译后修饰，在胞核和细胞浆蛋白中均有发现。精氨酸甲基化蛋白参与许多不同的细胞过程，包括转录调节、信号转导、RNA 代谢和 DNA 损伤修复 (1-3)。精氨酸甲基化由精氨酸 N 甲基转移酶 (PRMT) 的酶家族催化。该酶家族可催化甲基群组从 S-腺苷甲硫氨酸 (AdoMet) 转移到精氨酸胍氮上 (4)。精氨酸甲基化有三种不同形式：非对称二甲基化（aDMA，omega-NG，NG-二甲基精氨酸），其中两个甲基基团在精氨酸胍基氮原子的一端；对称二甲基化（sDMA，omega-NG，NG-二甲基精氨酸），其中每个甲基基团在精氨酸胍基氮原子的一端；单甲基化（MMA，omega-NG-二甲基精氨酸），其中只有一个甲基基团在精氨酸胍基氮原子上。每种修饰都有其潜在的不同功能。尽管所有 PRMT 蛋白都催化 MMA 的形成，但I 型 PRMT (PRMT1, 3, 4, 6) 可新增一个额外的甲基基团，从而产生 aDMA，而 II 型 PRMT （PRMT5 和7）可产生 sDMA。甲基化精氨酸残基经常在富含甘氨酸-精氨酸 (GAR) 蛋白结构域中出现，如 RGG、RG、RXR 重复序列 (5)。但是，PRMT4/CARM1 和 PRMT5 可以甲基化富含脯氨酸-甘氨酸-蛋氨酸 (PGM) 的基序内的精氨酸残基 (6)。

1. Bedford, M.T. and Richard, S. (2005) Mol Cell 18, 263-72.
2. Pahlich, S. et al. (2006) Biochim Biophys Acta 1764, 1890-903.
3. Bedford, M.T. and Clarke, S.G. (2009) Mol Cell 33, 1-13.
4. McBride, A.E. and Silver, P.A. (2001) Cell 106, 5-8.
5. Gary, J.D. and Clarke, S. (1998) Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 61, 65-131.
6. Cheng, D. et al. (2007) Mol Cell 25, 71-83.