产品使用信息
配合 Cell Signaling Technology 的来自免疫亲和纯化 (IAP) 步骤的 PTMScan® 试剂盒实验步骤使用。由于针对每位用户实验的 PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 的最佳量将取决于多个独特因素(如质谱仪灵敏度),因此用户可以根据需要稀释这些对照肽。
1. 分装 PTMScan® 对照肽磷酸化 Akt (RXXS*/T*),作为一次性使用单位储存在 -20°C 或继续立即使用。
2. 将样品肽重悬于适当的缓冲液和体积中,例如 1.4 mL PTMScan® IAP 缓冲液 (1X)。
3. 通过离心使样品肽澄清。
4. 将澄清的样品肽转移到含有 IAP 珠的试管中。
5. 将 10 µL PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 添加到 IAP 珠子和样品肽并充分混合。
6. 在 2 小时孵育步骤中继续使用 PTMScan® 或 PTMScan® HS 工作流程。
7. 在 LCMS 数据文件中检测 PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*)。
保存
保存在 -20ºC 下时,本产品可保持稳定 12 个月。分装,以避免多次冻融循环。
产品说明
PTMScan
® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 使得利用 PTMScan
® 或 PTMScan
® HS 工作流程对免疫亲和富集性能进行质量控制成为可能。这些合成肽包含可以借助相关的 PTMScan
® 或 PTMScan
® HS 免疫亲和纯化 (IAP) 珠子富集的特定翻译后修饰(PTM),以及可通过质谱仪与内源性肽区分开来的稳定重同位素。
背景
Akt 在介导关键细胞应答(包括细胞生长与存活、血管生成和转录调控)中发挥核心作用 (1-3)。它是重要激酶类别中的一员,即 Arg 定向激酶或 AGC 家族激酶,包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt、p70 S6 激酶和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性,其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点,具有在位置 -3 处 的 Arg (4,5)。Akt、p70 S6 激酶和 RSK 还在位置 -5(识别序列为 RXRXXS/T)处共享对 Arg 的特异性 (6)。在一项由 Cell Signaling Technology 位点发现小组的科学家合著的近期磷蛋白质组研究 (7) 中,使用磷酰-Akt 底物抗体,凭借 PTMScan
® 技术,发现了识别 RXRXXS/T 基序的 AGC 家族激酶的 300 多种下游底物。这些 Cell Signaling Technology 抗体是研究调控由 Akt 和其他 Arg 指引型激酶所致磷酸化过程以及高通量激酶药物发现的强大工具。
在这种分析中,PTMScan
® (RXXS*/T*) Motif Antibody 珠子偶联物用来特异性富集含 RXXS*/T* 基序的磷酸肽类(S* = 磷酰丝氨酸,T* = 磷酰苏氨酸)。
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