PTMScan^® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*) #62248

产品使用信息

配合 Cell Signaling Technology 的来自免疫亲和纯化 (IAP) 步骤的 PTMScan^® 试剂盒实验步骤使用。由于针对每位用户实验的 PTMScan^® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 的最佳量将取决于多个独特因素（如质谱仪灵敏度），因此用户可以根据需要稀释这些对照肽。

1. 分装 PTMScan^® 对照肽磷酸化 Akt (RXXS*/T*)，作为一次性使用单位储存在 -20°C 或继续立即使用。
2. 将样品肽重悬于适当的缓冲液和体积中，例如 1.4 mL PTMScan^® IAP 缓冲液 (1X)。
3. 通过离心使样品肽澄清。
4. 将澄清的样品肽转移到含有 IAP 珠的试管中。
5. 将 10 µL PTMScan^® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 添加到 IAP 珠子和样品肽并充分混合。
6. 在 2 小时孵育步骤中继续使用 PTMScan^® 或 PTMScan^® HS 工作流程。
7. 在 LCMS 数据文件中检测 PTMScan^® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*)。

保存

保存在 -20ºC 下时，本产品可保持稳定 12 个月。分装，以避免多次冻融循环。

产品说明

PTMScan^® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 使得利用 PTMScan^® 或 PTMScan^® HS 工作流程对免疫亲和富集性能进行质量控制成为可能。这些合成肽包含可以借助相关的 PTMScan^® 或 PTMScan^® HS 免疫亲和纯化 (IAP) 珠子富集的特定翻译后修饰(PTM)，以及可通过质谱仪与内源性肽区分开来的稳定重同位素。

CAS

75-05-8

背景

Akt 在介导关键细胞应答（包括细胞生长与存活、血管生成和转录调控）中发挥核心作用 (1-3)。它是重要激酶类别中的一员，即 Arg 定向激酶或 AGC 家族激酶，包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt、p70 S6 激酶和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性，其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点，具有在位置 -3 处 的 Arg (4,5)。Akt、p70 S6 激酶和 RSK 还在位置 -5（识别序列为 RXRXXS/T）处共享对 Arg 的特异性 (6)。在一项由 Cell Signaling Technology 位点发现小组的科学家合著的近期磷蛋白质组研究 (7) 中，使用磷酰-Akt 底物抗体，凭借 PTMScan^® 技术，发现了识别 RXRXXS/T 基序的 AGC 家族激酶的 300 多种下游底物。这些 Cell Signaling Technology 抗体是研究调控由 Akt 和其他 Arg 指引型激酶所致磷酸化过程以及高通量激酶药物发现的强大工具。

在这种分析中，PTMScan^® (RXXS*/T*) Motif Antibody 珠子偶联物用来特异性富集含 RXXS*/T* 基序的磷酸肽类（S* = 磷酰丝氨酸，T* = 磷酰苏氨酸）。

1. Marte, B.M. and Downward, J. (1997) Trends Biochem Sci 22, 355-8.
2. Jiang, B.H. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A 97, 1749-53.
3. Scheid, M.P. and Woodgett, J.R. (2000) Curr Biol 10, R191-4.
4. Montminy, M. (1997) Annu Rev Biochem 66, 807-22.
5. Pearson, R.B. and Kemp, B.E. (1991) Methods Enzymol 200, 62-81.
6. Manning, B.D. and Cantley, L.C. (2007) Cell 129, 1261-74.
7. Moritz, A. et al. (2010) Sci Signal 3, ra64.