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62248
PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*)
蛋白质组分析产品
细胞提取物

PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*) #62248

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PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*): Image 1
PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 组分:RRPT(p)LGVQLDD[K] 的注释串联质谱 (MS2)。
PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*): Image 2
PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 组分:RYPS(p)SISSSPQ[K] 的注释串联质谱 (MS2)。
PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*): Image 3
PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 组分(MS2):VRYDS(p)SNQV[K] 的注释串联质谱 。
PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*): Image 4
PTMScan® Control Peptides 磷酰-Ak (RXXS*/T*) 混合物中包含的肽。所有肽都经稳定同位素标记,用带括号的 R 表示,并含有一个用括号表示的磷酸根基团。
PTMScan® Control Peptides Phospho-Akt (RXXS*/T*): Image 5
使用 PTMScan® Phospho-Akt Substrate Motif mAb 1 (RXXS*/T*) Kit #5561 进行免疫亲和富集之前,以供应浓度 (1X at 200 fmol) 向小鼠胚胎肽类添加的 PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 的提取离子色谱图。将脱盐的肽在 Q Exactive 质谱仪上分析,并在 C18 柱上使用从 7.5% 到 32% 乙腈的 90 分钟反相梯度分离。对应于特定对照肽的峰标有保留时间和观侧的前体质量,峰高报告为每组每行的归一化水平 (NL)。

产品使用信息

配合 Cell Signaling Technology 的来自免疫亲和纯化 (IAP) 步骤的 PTMScan® 试剂盒实验步骤使用。由于针对每位用户实验的 PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 的最佳量将取决于多个独特因素(如质谱仪灵敏度),因此用户可以根据需要稀释这些对照肽。

1. 分装 PTMScan® 对照肽磷酸化 Akt (RXXS*/T*),作为一次性使用单位储存在 -20°C 或继续立即使用。
2. 将样品肽重悬于适当的缓冲液和体积中,例如 1.4 mL PTMScan® IAP 缓冲液 (1X)。
3. 通过离心使样品肽澄清。
4. 将澄清的样品肽转移到含有 IAP 珠的试管中。
5. 将 10 µL PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 添加到 IAP 珠子和样品肽并充分混合。
6. 在 2 小时孵育步骤中继续使用 PTMScan® 或 PTMScan® HS 工作流程。
7. 在 LCMS 数据文件中检测 PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*)。

保存

保存在 -20ºC 下时,本产品可保持稳定 12 个月。分装,以避免多次冻融循环。

产品说明

PTMScan® Control Peptides 磷酰-Akt (RXXS*/T*) 使得利用 PTMScan® 或 PTMScan® HS 工作流程对免疫亲和富集性能进行质量控制成为可能。这些合成肽包含可以借助相关的 PTMScan® 或 PTMScan® HS 免疫亲和纯化 (IAP) 珠子富集的特定翻译后修饰(PTM),以及可通过质谱仪与内源性肽区分开来的稳定重同位素。
CAS 75-05-8

背景

Akt 在介导关键细胞应答(包括细胞生长与存活、血管生成和转录调控)中发挥核心作用 (1-3)。它是重要激酶类别中的一员,即 Arg 定向激酶或 AGC 家族激酶,包括 cAMP-依赖性蛋白激酶 (PKA)、cGMP-依赖性蛋白激酶 (PKG)、蛋白激酶 C、Akt、p70 S6 激酶和 RSK。这些激酶具有相同的底物特异性,其特征为相对于磷酸化的 Ser 或 Thr 位点,具有在位置 -3 处 的 Arg (4,5)。Akt、p70 S6 激酶和 RSK 还在位置 -5(识别序列为 RXRXXS/T)处共享对 Arg 的特异性 (6)。在一项由 Cell Signaling Technology 位点发现小组的科学家合著的近期磷蛋白质组研究 (7) 中,使用磷酰-Akt 底物抗体,凭借 PTMScan® 技术,发现了识别 RXRXXS/T 基序的 AGC 家族激酶的 300 多种下游底物。这些 Cell Signaling Technology 抗体是研究调控由 Akt 和其他 Arg 指引型激酶所致磷酸化过程以及高通量激酶药物发现的强大工具。

在这种分析中,PTMScan® (RXXS*/T*) Motif Antibody 珠子偶联物用来特异性富集含 RXXS*/T* 基序的磷酸肽类(S* = 磷酰丝氨酸,T* = 磷酰苏氨酸)。
  1. Marte, B.M. and Downward, J. (1997) Trends Biochem Sci 22, 355-8.
  2. Jiang, B.H. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A 97, 1749-53.
  3. Scheid, M.P. and Woodgett, J.R. (2000) Curr Biol 10, R191-4.
  4. Montminy, M. (1997) Annu Rev Biochem 66, 807-22.
  5. Pearson, R.B. and Kemp, B.E. (1991) Methods Enzymol 200, 62-81.
  6. Manning, B.D. and Cantley, L.C. (2007) Cell 129, 1261-74.
  7. Moritz, A. et al. (2010) Sci Signal 3, ra64.

限制使用

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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