反应性 | H M R Mk |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 58 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人, 小鼠, 大鼠, 猴
鸡 , 牛 , 犬 , 猪 , 马
使用与人 TRIAD1 蛋白氨基末端附近的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白质 A 和肽亲和色谱纯化抗体。
E3 泛素蛋白连接酶 ARIH2 (TRIAD1) 是一种 Ariadne 亚家族连接酶,参与蛋白酶体降解相关蛋白的多泛素化过程。TRIAD1 核蛋白包含一个氨基末端酸性结构域、一对环指结构、两个羧基末端螺旋圈结构域以及一个位于环指结构之间的新的 C6HC DRIL/IBR 结构域。成对的环指结构与 DRIL/IBR 结构域一起形成一个高度保守的 TRIAD(两个环指结构与 DRIL)结构域 (1)。研究表明,TRIAD1 介导 Lys48 与 Lys63 蛋白多泛素化并起着骨髓生成负向调控因子的作用。通过泛素连接酶 UbcH7 与 UbcH13 介导蛋白泛素化,TRIAD1 泛素连接酶可抑制骨髓细胞增殖 (2,3)。在小鼠中实验性敲除 TRIAD1 具有致死效应,为严重的多器官炎症反应所致,可在胚胎期或晚些时候导致死亡。结果表明,TRIAD1 可结合树突细胞中的 IκBβ并促进 NF-κB 抑制剂降解 (4)。
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