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43811
Pyroptosis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Pyroptosis Antibody Sampler Kit #43811

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Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 8457#(下)对未经处理的 (-) 或经 LPS 处理(100ng/ml,3小时;+)的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb(上图)、总 Gasdermin D (L60) Antibody #93709(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,指示时间)处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Caspase-1 (D7F10) Rabbit mAb 对 THP-1 和 NK-92 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 Cleaved Caspase-1 (Asp297) (D57A2) Rabbit mAb(上图)或 Caspase-1 (D7F10) Rabbit mAb #3866(下图)对未转染 () 或转染过表达人 caspase-1 (+) 的表达载体的 COS-7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 Caspase-4 Antibody 对 KARPAS-299、THP-1 和 IM-9 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Caspase-5 (D3G4W) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对先后经 TPA #4174 (80 nM, 过夜) 分化和脂多糖 #14011 (1 μg/ml, 指定时间) 处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 8
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) # 8900 进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Gasdermin D (E8G3F) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 对 PC-3 细胞和 PC-3 GSDMD 敲除 (-/-) 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) #8900 进行蛋白印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 12
对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,6 小时)处理的 THP-1 细胞的 Cleaved Gasdermin D (Asp725) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入对照,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb。使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 Caspase-1 (D7F10) Rabbit mAb 对未转染或经人 caspase-1 转染的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 Cleaved Caspase-1 (Asp297) (D57A2) Rabbit mAb 对经 LPS 处理(1 mu-g/ml,8 小时)后用 TPA #9905(80 nM,整夜)分化的 THP-1 细胞培养基提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 Caspase-4 Antibody 对重组活化的 caspase-1、 -4 和 -5的提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Caspase-5 (D3G4W) Rabbit mAb(上)和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 (下) 对转染空载 (-) 或转染构建表达全长人 caspase-4 蛋白 (hCasp4; +) 或 caspase-5 蛋白 (hCasp5; +) 转染的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠肺进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对收集自 THP-1 细胞的细胞或培养基的提取物进行蛋白质印迹分析,并且这些 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后使用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理 (-) 或不用其进行处理 (+)。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 Gasdermin D (E8G3F) Rabbit mAb(上)或GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下)对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 20
使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb(绿色)对未经处理的(左)或经 LPS 处理(500 ng/ml,2 小时;右)的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 23
对来自 THP-1 细胞提取物的 Cleaved-IL-1β (Asp116) 进行免疫沉淀,且 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6小时)处理。泳道 1 是10 % input,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 沉淀,并且泳道 3 用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 沉淀。使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 Gasdermin D (E8G3F) Rabbit mAb (上图)或GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对采用 TPA #4174(50 ng/ml,过夜)分化然后经过 LPS #14011(5 μg/ml,指示时间)处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 对未经处理的(蓝色)或经 LPS 处理(100 ng/ml,3 小时;绿色)的 THP-1 细胞进行流式细胞术分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 作为二抗。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 26
在未裂解 Gasdermin D 肽(左图)或 Asp275 位点特异性裂解的 Gasdermin D 肽(右图)存在的情况下,使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 27
使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb(绿色),对使用 TPA #4174(80 nM, 24 小时)分化,并随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理或不用其处理的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 29
对 THP-1 细胞提取物的 Gasdermin D 蛋白进行免疫沉淀法分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Gasdermin D (E8G3F) Rabbit mAb。使用 Gasdermin D (E8G3F) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 30
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人体前列腺癌进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 32
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 33
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 34
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人脾脏细胞(左图,阳性)和骨骼肌细胞(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 35
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对经过 TPA #4174(左图)分化后再经过 LPS #14011(右图)处理的石蜡包埋的 THP-1 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
Pyroptosis Antibody Sampler Kit: Image 36
使用 Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
To Purchase # 43811T
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1 个试剂盒(9 x 20 微升)

产品说明

Pyroptosis Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测用于读取细胞焦亡的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

BRD4 (E8G3F) Rabbit mAb 可检测内源水平的总 Gasdermin D 蛋白。该抗体可识别 caspase-1 在细胞焦亡期间产生的30 kDa 氨基末端片段、caspase-3产生的43kDa片段以及两个位点裂解产生的21 kDa 片段。Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb 可检测仅在 Asp275 被裂解活化的人 Gasdermin D 蛋白的氨基末端片段。Caspase-1 (D7F10) Rabbit mAb 可检测全长人 caspase-1 的内源水平以及通过过表达激活的 p20 亚基。Cleaved Caspase-1 (Asp297) (D57A2) Rabbit mAb 可检测 Asp275 裂解活化产生的人 caspase-1 的 p20 亚基。IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 可检测全长蛋白的内源水平,但无法检测成熟 IL-1β 的内源水平。它可检测多达 100 pg 的重组成熟 IL-1β。Cleaved IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 可检测在 Asp116 被裂解活化的成熟 IL-1β 蛋白的内源水平。Caspase-4 Antibody 可检测总 caspase-4 以及 40 和 32 kDa 中间体形式的内源水平。Caspase-5 (D3G4W) Rabbit mAb 可检测 caspase-5 的内源水平。HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb 可检测总 HMGB1 的内源水平。它不会与其他 HMGB 蛋白发生交叉反应,包括 HMGB2 和 HMGB3。

来源/纯化

使用与人 Gasdermin D 中 Trp130 周围的残基以及与人 caspase-1 中 p20 亚基、人 caspase-1 中 Asp297、人 IL-1β 中 Asp116、人 caspase-5 中 Pro154 和人 HMGB1 中 Ala137 内的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用重组 IL-1β 蛋白对动物进行免疫接种来产生 IL-1β (D3U3E) Rabbit Mab。使用与人 caspase-4 蛋白中 Ile125 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

背景

细胞焦亡是细胞死亡的一个受调控通路,具有坏死的形态特征,包括细胞肿胀、质膜孔隙形成以及炎性反应参与并释放多种损伤相关分子模式 (DAMP),例如 HMGB1 与 IL-1β 和 IL-18 等炎性细胞因子 (1,2)。在有微生物病原体表达的病原体相关分子模式 (PAMP) 或细胞源性 DAMP 时,天然免疫系统的细胞(例如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞)中通常会诱发细胞凋亡。诱发 caspase-1 蛋白水解激活的炎性体在组装后,会裂解 IL-1β 和 IL-18 等炎性细胞因子成为成熟形式,进而诱导细胞焦亡 (3)。细胞焦亡的一个关键特征是 Gasdermin D 被 caspase-1 和小鼠 caspase-11(或人 caspase-4/5)裂解 (4-6)。裂解时,Gasdermin D 的氨基末端片段低聚化形成一个允许分泌炎性 DAMP 和细胞因子的孔隙。典型的炎性体装配通常包含一个胞质模式识别受体 (PRR;一个核苷酸结合结构域和亮氨酸富集重复序列 [NLR] 或 AIM2 样家族成员)、一个接头蛋白 (ASC/TMS1) 和 pro-caspase-1。不同炎性体复合体可检测诱发细胞焦亡的不同 PAMP 和 DAMP。NLR 和 NLRP3 诱发的最具特征性的通路通过一个两步骤的过程发生。第一步是一个引发信号,NF-κB 被激活后会诱导一些炎性体组分的表达,包括 NLRP3、pro-IL-1β 和 pro-IL-18。在第二个激活步骤中,caspase-1 被激活且 Gasdermin D 和细胞因子通过蛋白水解被激活。在非典型通路中,caspase-4 和 caspase-5 会在 LPS 刺激后直接诱发单核细胞中的 Gasdermin D 裂解 (5,7)。
  1. Frank, D. and Vince, J.E. (2019) Cell Death Differ 26, 99-114.
  2. Shi, J. et al. (2017) Trends Biochem Sci 42, 245-54.
  3. Malik, A. and Kanneganti, T.D. (2017) J Cell Sci 130, 3955-63.
  4. He, W.T. et al. (2015) Cell Res 25, 1285-98.
  5. Shi, J. et al. (2015) Nature 526, 660-5.
  6. Kayagaki, N. et al. (2015) Nature 526, 666-71.
  7. Viganò, E. et al. (2015) Nat Commun 6, 8761.

通路和蛋白

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