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17229
Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II
一抗
抗体小包装组合

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II #17229

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Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 1

使用 Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb #4223(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照 HeLa 细胞(泳道 1)或 Bcl-2 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)进行蛋白印迹分析。Bcl-2 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 Bcl-2 的特异性。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 2

使用 Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析,使用并 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 检测 DNA 。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 3

使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb 对 SK-OV-3 细胞(蓝色)和 MCF7 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 4

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道2)或 Phospho-Mcl-1 (Thr163) (D5M9D) Rabbit mAb (泳道3),对经 TPA #4174 (200 nM, 30分钟) 处理的 KARPAS-299 细胞磷酸 Mcl-1 (Thr163) 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% input。使用 Phospho-Mcl-1 (Thr163) (D5M9D) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 作为二抗以避免与 IgG 重链和轻链交叉反应。KARPAS 细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 5

以非特异性阴性对照抗体(红色)为对照,用Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb(蓝色),对未经处理的Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 6

使用 A1/Bfl-1 (D1A1C) Rabbit mAb 对转染空载的 (-) 或转染 A1/Bfl-1 蛋白 (hA1/Bfl-1; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 7

使用 Bcl-w (31H4) Rabbit mAb 对 A673 细胞系和 C2C12 细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 8

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 9

使用 Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific) 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 10

使用 Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb (上图) 或 Bcl-2 #2876 (下图),对未经处理或经紫杉醇 (1 mM; 过夜) 处理以及使用或不使用 λ 磷酸酶的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 11

使用与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (红色)对比后的 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb(蓝色),对 L-929 细胞进行流式细胞分析。使用 Anti-rabbit IgG (H+L),F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 12

使用 Phospho-Mcl-1 (Thr163) (D5M9D) Rabbit mAb (上图) 或 Bim (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理 (-) 或 TPA #4174 (200 nM,30分钟; +) 处理的 KARPAS-299 和 Raji 细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。KARPAS 细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 13

使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb(绿色)对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 14

使用 A1/Bfl-1 (D1A1C) Rabbit mAb 对 U-937 和 UACC-62 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 15

使用 Bcl-w (31H4) Rabbit mAb 对重组的 Bcl-w(氨基酸 1-172)进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 16

使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (绿色)对 MCF7(左)、L-929(中)和 SK-OV-3(右)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight554™13054 Phalloidin #(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 17

使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 18

对 MCF7 细胞提取物中的 Mcl-1 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 的输入,泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,而泳道 3 是 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb。使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用具有构象特异性二抗,来避免与 IgG 发生交叉反应。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 19

在对照肽(左)或 Bcl-xL Blocking Peptide #1225(右)存在的情况下,使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 20

使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb,对转染空载或转染表达全长人 Mcl-1 (hMcl-1; +) 或小鼠 Mcl-1 (mMcl-1; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物,进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 21

使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 对显示细胞质定位的石蜡包埋的人前列腺癌进行免疫组织化学分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 22

使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 23

使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 对 Jurkat 细胞提取物中的 Bcl-xL 进行免疫沉淀。泳道 1 为裂解物对照,泳道 2 为单独抗体,泳道 3 为抗体加裂解物。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 24

使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb,对 Jurkat 和 HeLa(人)、COS(猴)、NIH/3T3 和 L929 (小鼠)以及 PC12 和 C6(大鼠)细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II: 图像 25

使用Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb #2764 (上) or α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 (下). 对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-), SignalSilence® BcL-xL siRNA I (+),或 SignalSilence® Bcl-xL siRNA II #6363 (+)转染的HeLa细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 确定 Bcl-xL 表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则被用于上样对照。

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17229T
1 个试剂盒(7 x 20 µl)

产品说明

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit 是一种经济合算的方式,可用来评估 Bcl-2 家族的众多成员。该试剂盒包含的一抗足以进行至少 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Pro-Survival Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II 中的每种抗体仅可识别其内源水平的特定靶标。该抗体不会与其他 Bcl-2 家族成员发生交叉反应。A1/Bfl-1 (D1A1C) Rabbit mAb 可能会与某些细胞系中 50 和 130 kDa 的未知蛋白发生交叉反应。Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb 仅在 Ser70 位点被磷酸化时,才能检测出内源水平的人 Bcl-2 。Phospho-Mcl-1 (Thr163) (D5M9D) Rabbit mAb 仅在 Thr163 磷酸化时,可识别内源水平的 Mcl-1 蛋白。该抗体也可与部分细胞系中 70 kDa 的未知蛋白发生交叉反应。

来源/纯化

使用与人 Bcl-2 的 Gly47、人 Bcl-xL 的 Asp61、小鼠 Mcl-1 的 Pro60、人 A1/Bfl-1 的 Gly29 和人 Bcl-w 的 Ala39 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生兔单克隆抗体。使用与人 Bcl-2 的 Ser70 和人 Mcl-1 的 Thr163 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种,来产生磷酸特异性单克隆抗体。

背景

Bcl-2 家族由进化上保守的多种蛋白质组成,这些蛋白质含有通过控制线粒体膜通透性和细胞色素 C 释放调节凋亡的 Bcl-2 同源结构域 (BH) (1-3)。已经鉴定到介导蛋白质相互作用的四种 BH 结构域 (BH1-4)。基于功能和序列同源性,该家族可以划分成三组:促存活成员包括 Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1、A1 和 Bcl-w;促凋亡蛋白包括 Bax、Bak 和 Bok,并且“仅含 BH3”蛋白包括 Bad、Bik、Bid、Puma、Bim、Bmf、Noxa 和 Hrk。促进死亡的和抑制死亡的 Bcl-2 家族成员之间的相互作用导致其中促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的比率控制细胞转归的变阻器模型 (4)。因此,促存活成员通过结合于并拮抗促死亡成员而执行其行为。通常,“仅含 BH3 成员”可以结合于并拮抗促存活蛋白,导致凋亡增加 (5)。尽管这个系统或许存在一些冗余性,但这些家族成员中许多成员的组织特异性、转录调节作用和翻译后调节作用可以解释不同的生理学作用。

现已在 Bcl-2 中发现了多个磷酸化位点,包括 Thr56、Ser70、Thr74 和 Ser87 (6)。这些磷酸化位点可能是 ASK1/MKK7/JNK1 通路的靶标,而 Bcl-2 磷酸化可能是有丝分裂活动的一个标记物 (7,8)。在糖皮质激素诱导 T 淋巴细胞凋亡期间,Bcl-2 的 Thr56 或 Ser87 位点突变会抑制其抗凋亡活性 (9)。白介素 3 和 JNK 诱导的 Bcl-2 于 Ser70 位点 磷酸化可增强其抗凋亡功能 (10)。

Mcl-1 在佛波醇酯处理、微管损害剂、氧化应激和细胞因子撤除等刺激下发生磷酸化 (11-14)。在 Thr163(位于 PEST 区域内部保守的 MAP 激酶/ERK 位点)处的磷酸化可减缓 Mcl-1 蛋白质周转 (13),但是可以为在 Ser159 位点由 GSK-3 介导的磷酸化做好准备,后一种磷酸化可导致 Mcl-1 去稳定化 (14)。

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  2. Antonsson, B. and Martinou, J.C. (2000) Exp Cell Res 256, 50-7.
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  13. Domina, A.M. et al. (2004) Oncogene 23, 5301-15.
  14. Maurer, U. et al. (2006) Mol Cell 21, 749-60.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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