反应性 | H M R |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 80 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
Phospho-PKCdelta (Tyr311) Antibody 仅在 PKCδ 在酪氨酸 311 位点被磷酸化时方可检测内源水平的 PKCδ。该抗体不会与其他磷酸化 PKC 同工型发生交叉反应。
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 PKCδ 中 Tyr313(相当于小鼠和大鼠中的 Tyr311)周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。
在调控分泌、基因表达、细胞增殖和肌肉收缩等多个细胞反应的级联中,蛋白激酶 C (PKC) 激活是该级联中最早期的一个活动 (1,2)。根据钙依赖性和激活因子,PKC 同工型属于三个亚家族。典型 PKC 因其 C2 结构域对钙具有依赖性,可通过其半胱氨酸富集 C1 结构域被磷脂酰丝氨酸 (PS)、甘油二酯 (DAG) 和佛波酯 (TPA, PMA) 激活。新型和非典型 PKC 均有钙依赖性,但只有新型 PKC 才能被 PS、DAG 和佛波酯激活 (3-5)。这三个 PKC 亚家族的成员包含一个假底物或自抑制结构域,可结合催化结构域中的底物结合位点,以防止在没有辅因子或激活因子的情况下被激活。PKC 活性的控制通过三个独立的磷酸化事件进行调节。活化环中的 Thr500、Thr641(自磷酸化)以及羧基末端疏水性位点 Ser660 均会发生体内磷酸化 (2)。非典型 PKC 同工型缺乏疏水区域磷酸化,这与谷氨酸的存在有关,与在更典型的 PKC 同工型中发现的丝氨酸或苏氨酸残基无关。PDK1 或相关酶负责 PKC 的激活。PKC 超家族最近新增加的成员是 PKCμ (PKD),它通过其 C1 结构域被 DAG 和 TPA 调控。PKD 的特点是有一个 PH 结构域,它有独特的底物识别和高尔基体定位特征 (6)。PKC 相关激酶 (PRK) 缺少 C1 结构域,并且不对 DAG 或佛波酯产生反应。磷脂酰肌醇脂质激活 PRK,小 Rho 家族 GTP 酶结合同源区域 1 (HR1),可调节 PRK 激酶活性 (7)。
PKCδ 酪氨酸残基磷酸化表明在确定其功能特性方面发挥作用。在 PKCδ 的催化结构域、调节域和铰链区可发现磷酸化的酪氨酸残基 (8)。根据磷酸化酪氨酸模式,尚无明确描述的调节特异性,但这些不同的磷酸化经证实会降低 PKCδ 蛋白水平、增强激酶活性或底物特异性的选择性 (8-10)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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