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9789
Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit
一抗
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Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit #9789

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Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 1

使用与浓度匹配的 XP® Rabbit (DA1E) mAb IgG Isotype Control #3900（红色）相对比的 Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb 对未经（蓝色）或经 EGF 处理（绿色）的 A549 细胞进行流式细胞分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经（绿色）或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM、1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 Phospho-Gab1 (Tyr627) (C32H2) Rabbit mAb (上图) 或 Gab1 Antibody #3232 (下图)，对未经处理或经调节蛋白刺激的 T47D 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® 兔单克隆抗体（实线）或浓度匹配的兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900（虚线）对经 U0126（10 µM，2 小时；绿色）处理或经 TPA #4174 （200 nM，30 分钟；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用 Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody (上图) 或 Shc antibody#2432(下图)，对未经处理或经 EGF 处理(100 ng/ml) 血清饥饿18小时的 HepG2 细胞以及未经处理或经抗 CD3 抗体(1 µg/ml，10分钟) 处理的 Jurkat 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb 对未经处理（蓝色）或 GM-CSF 处理（绿色）的 TF-1 细胞进行流式细胞分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 hospho-c-Cbl (Tyr700) (D16D7) Rabbit mAb (泳道4和6)，对未经处理 (-) 或用钒酸钠 (1mM; +) 处理的 Jurkat 细胞提取物的磷酸化 c-Cbl 进行免疫沉淀 (IP)。使用相同的抗体进行蛋白质印迹检测。泳道 1 和 2 为 10% input。泳道3和5是使用兔 (DA1E) mAb IgG XP ®同种型对照＃3900进行的 IP。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线），对未经处理（蓝色）或已经 mPDGFbb（200ng/ml，15 分钟；绿色）处理的 NIH/3T3 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 9

一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 10

使用 Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb（绿色）对未经（左）或经 EGF 处理（右）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（绿色），对经 LY294002 处理（左）或经胰岛素处理（右）的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370（绿色）和 S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb #2317（红色），对未经处理（上）或经 λ 磷酸酶处理（下）的果蝇卵泡进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) XP® (D47E7) Rabbit mAb （绿色）和 Pan-Keratin (C11) Mouse mAb #4545（红色），对经 EGF 处理（左）或未经处理（右）的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Phospho-c-Cbl (Tyr700) (D16D7) Rabbit mAb (左图)，对未经处理 (-) 或用钒酸钠 (1mM; +) 处理的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。在该抗体孵育前 (右图)，使用 c-Cbl (Tyr700) 磷酸肽 (中图) 或 c-Cbl (Tyr700) 非磷酸肽对抗体进行预孵育，来验证抗体的磷酸化特异性。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb（泳道 3），对经 hEGF #8916 刺激的 A-431 细胞提取物 phospho-PLCγ1 (Tyr783) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb 和 SignalSlide™ Phospho-EGF Receptor IHC Controls #8102对未经（左）或经 EGF 处理（右）的石蜡包埋的 KYSE450 细胞团进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（左）或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559（右），对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意：PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370（绿色）和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700（红色），对饥饿过夜，然后用 U0126 #9903（10 uM，2 小时；左）或 PDBu (Phorbol 12,13-Dibutyrate) #12808（100 nM，15 分钟；右）处理的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb，对未经处理或经红细胞生成素处理（EPO；3 单位/ml，5 分钟）的 UT-7 细胞、未经处理或经 Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor #8922 处理（hGM-CSF；100 ng/ml，10 分钟）的 TF-1 细胞、未经处理或经 Human Interleukin-2 #8907 处理（hIL-2；100 ng/ml，10 分钟）的 NK-92 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Phospho-c-Cbl (Tyr700) (D16D7) Rabbit mAb (上图) 或 c-Cbl (D4E10) Rabbit mAb #8447(下图)，对未经处理 (-) 或用钒酸钠 (1mM; +) 处理的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb（上）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下），对未经处理 (-) 或经 hPDGF-BB #8912 刺激（5分钟；+）的 NIH/3T3 细胞、未经处理 (-) 或经 hEGF #8916 刺激（5 分钟；+）的 A-431 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb 对对照（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的 HCC827 异种移植物进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060，对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112（左）和 TBST/5% Normal Goat Serum（右）对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 24

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb，对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 25

使用 Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb（上）和 EGF Receptor Antibody #2232（下）对未经或经 EGF 刺激的 BxPC-3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 26

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 27

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb，对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（未经处理（左）或经 LY294002 处理（右）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb on SignalSlide™ Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) IHC Controls #8103，（对 U0126 #9903（左）或 TPA # 4174（右）处理的石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞）进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 30

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 31

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 和 p44/42 MAPK (Erk1/2) (3A7) Mouse mAb #9107，对未经处理或经 U0126 #9903（10 µM，1 小时）或 TPA #4174（200 nM，10 分钟）处理的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 32

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。（组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠）

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 33

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb（上）或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695（下），对经 λ 磷酸酶或 TPA #4174 处理（如图）的 293 NIH/3T3 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 34

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 35

对经 Calyculin A #9902（100nM，30 分钟）处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb，泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

Phospho-EGF Receptor Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 36

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（上）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下），对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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产品说明

Phospho-EGF Receptor Pathway Sampler Kit 是一种高性价比的方式，用于评估 EGF 受体通路的多个成员激活状态，包括磷酸化 EGF 受体、Stat5、c-Cbl、Shc、Gab1、PLCγ1、Akt 和 p44/42 MAPK。该试剂盒包含足量的一抗和二抗，可进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Phospho-EGF Receptor Pathway Sampler Kit 中每种抗体可识别其特定靶标的磷酸化形式。Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb 可与酪氨酸磷酸化蛋白发生微弱的交叉反应。Phospho-Gab1 (Tyr627) (C32H2) Rabbit mAb 可与磷酸化 Gab2、Gab3 或激活的受体酪氨酸激酶 (RTK) 发生交叉反应。Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody 可与激活的 EGF 受体蛋白交叉反应。

来源/纯化

使用与人 Shc 的 Tyr239/240 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种，以产生激活态的多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。使用与 c-Cbl 的 Tyr700、人 EGF 受体的 Tyr1068、Stat5a 的 Tyr694、人 Gab1 的 Tyr627、人 Akt 的 Ser473、人 p44 MAP 激酶的 Thr202/Tyr204 或人 pLCγ1 蛋白的 Tyr783 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种，以产生兔单克隆抗体。

背景

表皮生长因子 (EGF) 受体是一种 HER/ErbB 蛋白家族的跨膜酪氨酸激酶。配体结合后，会导致受体二聚化、自磷酸化、下游信号转导激活、内化以及溶酶体降解 (1,2)。激酶结构域中 EGF 受体 (EGFR) 在 Tyr845 的磷酸化具有稳定激活环、维持酶激活状态以及为底物蛋白提供结合表面的作用 (3,4)。c-Src 与 EGFR 在 Tyr845 的磷酸化有关 (5)。PLCγ 的 SH2 结构域在磷酸化的 Tyr992 位点结合，从而激活 PLCγ 介导的下游信号转导 (6)。EGFR 在 Tyr1045 的磷酸化为接头蛋白 c-Cbl 提供了一个主要锚定位点，以便让 EGFR 在激活后进行受体泛素化和降解 (7,8) GRB2 接头蛋白在磷酸化-Tyr1068 位点与激活的 EGFR 相结合 (9)。一对磷酸化的 EGFR 残基（Tyr1148 和 Tyr1173）为 Shc 支架蛋白提供了一个锚定位点，两个位点都参与了 MAP 激酶信号转导的激活 (2)。EGFR 在特定丝氨酸和苏氨酸残基上的磷酸化会降低 EGFR激酶活性。EGFR 羧基末端残基 Ser1046 和 Ser1047 被 CaM 激酶 II 磷酸化，其中任何一个丝氨酸突变都会导致 EGFR 酪氨酸自磷酸化上调 (10)。

  1. Hackel, P.O. et al. (1999) Curr Opin Cell Biol 11, 184-9.
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  10. Feinmesser, R.L. et al. (1999) J Biol Chem 274, 16168-73.

通路和蛋白

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