反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 30 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
人
小鼠, 大鼠
使用与人 CDK5 蛋白中 Tyr15 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过肽亲和色谱纯化抗体。
周期素依赖性激酶 (CDK) 是由周期素激活的丝氨酸/苏氨酸激酶,可调控真核细胞周期进程。CDK5 与其家庭成员有很高的序列同源性,它被认为主要在有丝分裂后神经元中起作用,可调节这些细胞的结构。与细胞周期素类似,尽管缺乏序列同源性, 但调节亚基 p35 和 p39 可与 CDK5 结合并激活它。CDK5 广泛表达,但因为有丝分裂后神经元的 p35 和 p39 呈窄谱表达模式,据检测其主要在中枢神经系统中有高水平激酶活性。虽然尚无某个底物被归为 P35 或 P39,但已确定了许多 CDK5 底物。CDK5 底物包括 p35、PAK1、Src、β-链蛋白、tau、神经丝-H、神经丝-M、突触素 1、APP、DARPP32、PP1-抑制剂和 Rb。p35 可被泛素化蛋白酶体通路快速降解 (T1/2 <20 min) (1)。但是,p35 稳定性会随着 CDK5 激酶活性减小而增加,如同 Thr138 位点 p35 被 CDK5 磷酸化降低 (2)。钙蛋白酶剪切 p35 蛋白酶可因神经毒性损害生成 p25,导致 CDK5 通过 p25 长时间激活。研究表明了神经退行性疾病,例如阿尔茨海默病和肌萎缩性脊髓侧索硬化症 (ALS) 中 p25 发生蓄积(3,4)。
已经证实 CDK5 在 Tyr15 位点的磷酸化在神经元发育中增加 CDK5 活性,并且认为在其他相关功能中发挥了轴生长调节的作用 (5)。
探索与本品相关的通路。
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