反应性 | H |
灵敏度 | 转染性 |
MW (kDa) | 75 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
流式细胞术(固定/通透) | 1:25 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:404
人
使用与人 cdc25C 的 Ser198 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白质 A 和肽亲和色谱纯化抗体。
cdc25C 是一种负责 cdc2 去磷酸化和激活 cdc2 的蛋白磷酸酶,这在调节所有真核细胞进入有丝分裂的过程中是一个关键的步骤 (1)。cdc25C 在整个间期在 Ser216 位点被 c-TAK1 结构性磷酸化,而此位点的磷酸化对 G2/M 检查点的 DNA 损伤具有依赖性 (2)。Cdc25C 在 Ser216 位点被磷酸化后,可结合 14-3-3 蛋白家族成员,进而在细胞浆中分离 cdc25C,避免过早的有丝分裂 (3)。检查点激酶 Chk1 和 Chk2 在 DNA 损伤后会在 Ser216 位点磷酸化 cdc25C (4,5)。
在前期,polo 样激酶 1 (PLK1) 在 Ser198 处磷酸化 cdc25C,导致从细胞质转移到细胞核,其中 cdc25C 可与 cdc2/周期素 B 相互作用,从而进行至有丝分裂的剩余阶段6。
探索与本品相关的通路。
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