反应性 | H M |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 68, 70 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
Phospho-CaMKK2 (Ser495) 抗体仅识别 Ser495 位点被磷酸化的 CaMKK2 蛋白的内源水平。在 42 kDa 和 25 kDa 观察到未知来源的条带。
人, 小鼠
大鼠
使用与人 CaMKK2 蛋白的 Ser495 周围残基相对应合成的磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。
钙/钙调素依赖性蛋白激酶激酶2 (CaMKK2) 是钙调蛋白激酶家族的一员,包含一个中央丝氨酸/苏氨酸激酶域,随后是一个由重叠的自抑制和 CaM 结合区域组成的调节域 (1) 。CaMKK2 在其结合 ATP 的结构域旁存在一个独特的脯氨酸/精氨酸/甘氨酸富集区 (2) ,使其有别于其他 CaMK 家族成员。CaMKK2 磷酸化 CaMKI 的 Thr177 位点和 CaMK IV 的 Thr200 位点 (3) 。CaMKK2 在对钙离子 (4) 应答时,也会磷酸化 AMPKα (4) 。CaMKK2 与长期记忆的形成 (5) 及脂肪细胞的发育相关 (6) 。在认定参与神经细胞死亡 (7) 的信号级联中,CaMKK2 因死亡相关蛋白激酶 (DAPK) 发生 Ser511 磷酸化。
已鉴别包括 Ser495 在内的多个 CaMKK2 磷酸化位点,并且 CAMKK2 自身抑制区的 C 末端磷酸化可调节其功能和定位 (8)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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