反应性 | H M R |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 78 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:263
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
Phospho-BMAL1 (Ser42) Antibody 仅当 Ser42 磷酸化后可识别内源水平的 BMAL1 蛋白。该抗体可识别部分细胞中约40kDa 和100 kDa 的额外蛋白。
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 BMAL1 蛋白的 Ser42 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。
昼夜节律控制了许多关键生理过程,这些过程随大约 24 小时内的某个时间段波动。这些生理过程包括醒睡周期、糖、脂肪和药物代谢、心率、激素分泌、肾血流体温、以及细胞的基本生理过程(如 DNA 修复、细胞分裂周期计时)(1,2)。哺乳动物的昼夜节律系统包含许多独立的组织特异性生物钟(外周生物钟),这些生物钟是由位于脑组织中视交叉上核 (SCN) 中的昼夜节律主要起搏点控制的 (1,2)。周期性昼夜节律主要通过明-暗周期体现,后者是通过视觉系统得以感知并由 SCN 进行处理。SCN 处理明-暗信息并通过神经和激素输出信号来同步外周生物钟 (1,2)。
细胞生物钟包含互相交织的正反调节环或调节分支 (1,2)。正性调节分支包括 CLOCK 和 BMAL1 蛋白,这是两个含有螺旋-环-螺旋-PAS 结构的基本转录因子,可结合 E 框增强子成分并激活其靶标基因的转录。CLOCK 是一个组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 蛋白,可乙酰化组蛋白 H3 和 H4 (3)。BMAL1 可结合到 CLOCK 并增强其 HAT 活性 (3)。CLOCK/BMAL1 二聚体在胞核/胞质定位和蛋白水平都表现出周期振荡,二者都可通过磷酸化进行调节 (4,5)。CLOCK/BMAL1 的靶标基因包括 Cry 和 Per 基因,二者的蛋白形成了生物钟系统的负调控分支 (1,2)。CRY 和 PER 蛋白 (CRY1、CRY2、PER1、PER2 和 PER3) 形成低聚物,该低聚物同样可在胞核与细胞浆之间周期性往返。在胞核中,CRY/PER 蛋白可抑制 CLOCK/BMAL1 介导的转录激活,因此完成生理转录环 (1,2)。在组织中,大约百分之六到八的基因显示出昼夜节律的表达模式 (1,2)。基因表达的这种 24 小时周期性是源于细胞生物钟系统的正和负调节分支协同作用,并且由 SCN 接收到的外界信号进行微调。
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