反应性 | M |
敏感性 | 转染性 |
MW (kDa) | 23 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:500 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
Phospho-Bad (Ser136) Antibody 仅当 Ser136 磷酸化后可检测转染水平的 Bad。该抗体不能检测其他位点磷酸化的 Bad,也不能检测相关家族成员。
小鼠
人, 大鼠
使用与小鼠 Bad 的 Ser136 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。
Bad 是 Bcl-2 促凋亡家族的一员,它通过转移 Bax 与 Bcl-2 和 Bcl-xL 结合而促进细胞死亡 (1,2)。存活因子(如 IL-3)能够通过激活细胞内信号转导通路,导致 Bad 在 Ser112 和 Ser136 位点被磷酸化,进而抑制 Bad 的凋亡活性 (2)。在这些位点的磷酸化会促进 Bad 与 14-3-3 蛋白结合,从而阻止 Bad 与 Bcl-2 和 Bcl-xl 的结合 (2)。Akt 在 Ser136 位点磷酸化 Bad 可促进细胞存活 (3,4)。Bad 在体内和体外都能够被 p90RSK (5,6) 和线粒体锚定 PKA 在 Ser112 位点磷酸化 (7)。PKA 对 BH3 结构域 Ser155 位点的磷酸化在阻止 Bad 和 Bcl-xL 的二聚化过程中发挥重要作用 (8-10)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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