对促销感兴趣？ | 点击此处 >>
40749
Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody
一抗
多克隆抗体
  1. 产品
  2. 一抗
  3. Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody

Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody #40749

引用 (0)
筛选器：
  1. WB
  2. IHC
Western Blotting Image 1: Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody

使用 Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) 抗体（上图）、ATF-2/ATF-7 (A9G1M) 兔单克隆抗体 #82870 （中间）或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457 （下图），对未经处理 (-) 或紫外线处理 (50 MJ/cm2，20 分钟恢复；+）的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Western Blotting Image 2: Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody

使用 Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) 抗体（上图）、Myc-Tag (71D10) 兔单克隆抗体 #2278（中图）和 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图），对转染空载 (-) 或转染带有 Myc 标签的全长人 ATF-2 蛋白 (hATF-2-Myc; +) 或 Myc 标签的全长人 ATF-7 蛋白 (hATF-7-Myc; +) 表达载体的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Immunohistochemistry Image 1: Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody

使用 Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) 抗体 对未经（左图）或已经 λ 磷酸酶（右图）处理的石蜡包埋的人肺腺癌进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 2: Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody

使用 Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) 抗体 对石蜡包埋的人非小细胞肺癌进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 3: Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) Antibody

使用 Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) 抗体 对石蜡包埋且未经处理 (左图) 或已经 Anisomycin#2222 处理 (右图) 的 NIH/3T3 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

图像库
了解有关我们如何获得图像的详情
购买 # 40749S
产品货号 规格 价格 库存
40749S		 100 µl

定制制剂

支持数据

反应性 H M R Mk
敏感性 内源性
MW (kDa) 65-75
来源 兔

应用缩写：

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
蛋白质印迹法 1:1000
免疫组织化学（石蜡） 1:100

保存

保存在 10mM sodium HEPES（pH 为 7.5）、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

实验步骤

打印

查看 > 折叠 >

蛋白质印迹法实验步骤

要进行蛋白质印迹法分析，在 4°C 下，将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育，轻晃孵育一整夜。

注意：请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。

A. 溶液和试剂

从样品制备至检测，蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供：#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：(#9808) 要制备 1 L 1X PBS：加入 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 并混合。
  2. 10 X Tris 盐缓冲液 (TBS)：(#12498) 要制备 1 L 1X TBS：加入 100 ml 10X 至 900 ml dH2O 并混合。
  3. 1X SDS 上样缓冲液：Blue Loading Pack (#7722) 或 Red Loading Pack (#7723) 通过添加 1/10 体积的 30X DTT 至 1 体积的 3X SDS 上样缓冲液，以制备新鲜的 3X 还原性上样缓冲液。用 dH2O 将其稀释至 1X。
  4. 10X Tris-Glycine SDS 电泳缓冲液：(#4050) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液：添加 100 ml 10X 电泳缓冲液至 900 ml dH2O 中并混合。
  5. 10X Tris-Glycine 转移缓冲液：(#12539) 要制备 1 L 1X 转移缓冲液：将 100 ml 10X 转移缓冲液添加至 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中，并混合。
  6. 含有 Tween® 20 (TBST) 的 10 X Tris 盐缓冲液：(#9997) 要制备 1 L 1X TBST： 将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O 中并混合。
  7. 脱脂奶粉：(#9999)。
  8. 封闭缓冲液：含 5% w/v 脱脂奶粉的 1X TBST；要制备 150 ml，将 7.5 g 脱脂奶粉添加至 150 ml 1X TBST 中并充分混匀。
  9. 洗涤缓冲液：(#9997) 1X TBST。
  10. 牛血清白蛋白 (BSA)： (#9998)。
  11. 一抗稀释缓冲液：含 5% BSA 的 1X TBST；要制备 20 ml，添加 1.0 g BSA 至 20 ml 1X TBST，然后充分混匀。
  12. Biotinylated Protein Ladder Detection Pack：(#7727)。
  13. Blue Prestained Protein Marker, Broad Range (11-250 kDa)： (#59329)。
  14. 印迹膜：(#12369) 本实验步骤针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常推荐 0.2 µm 孔径。
  15. HRP 偶联二抗：Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody (#7074)。
  16. 检测试剂：SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。

B. 蛋白质印迹

制备样品的常规流程。

  1. 添加含有调节因子的新鲜培养基，使其对细胞进行处理一段时间。
  2. 从培养物中吸出培养基；用 1X PBS 洗涤细胞；吸出。
  3. 加入 1X SDS 样品缓冲液（6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径的平板 500 µl）来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移至微量离心管。置于冰上。
  4. 超声处理 10–15 秒以完成细胞裂解并剪切 DNA（以降低样品粘度）。
  5. 取 20 µl 样品，在 95–100°C 下加热 5 分钟；放在冰上冷却。
  6. 微量离心机内离心 5 分钟。

  7. 上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。

    注意：建议将预染蛋白分子量标准品（#59329，10 µl/泳道）上样，以验证转膜的效率，生物素化蛋白质标准品（#7727，10 µl/泳道）可以直接在膜上显出条带以确定分子量。

  8. 电转至硝酸纤维素膜 (#12369)。

C. 膜封闭和抗体孵育

注意：体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜；对于不同尺寸的膜，可相应调整体积。

I. 膜封闭

  1. （可选）转移之后，在室温下用 25 ml TBS 将硝酸纤维素膜洗涤 5 分钟。
  2. 将膜置于 25 ml 封闭缓冲液中，在室温下孵育 1 小时。
  3. 用 15ml TBST 洗涤三次，每次 5 分钟。

II. 一抗孵育

  1. 将膜和一抗（按照产品网页中建议的适当稀释度和稀释液）置于 10 ml 一抗稀释缓冲液中在 4°C 下孵育过夜并不时轻轻晃动。
  2. 用 15ml TBST 洗涤三次，每次 5 分钟。
  3. 使用 10 ml 封闭缓冲液稀释 Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody （#7074，按 1:2000 的比例）和 anti-biotin, HRP-linked Antibody （#7075，按 1:1000–1:3000 的比例）用以检测生物素化蛋白标准品。将膜与稀释液一起孵育，在室温下轻轻摇晃孵育 1 小时。
  4. 用 15ml TBST 洗涤三次，每次 5 分钟。
  5. 继续进行检测（D 部分）。

D. 蛋白质检测

使用说明：

  1. 在 TBST 中清洗与膜结合的 HRP (Antibody Conjugate) 三次，持续 5 分钟。
  2. 通过稀释一部分 2X 试剂 A 和一部分 2X 试剂 B（例如：要制备 10 ml，则添加 5 ml 试剂 A 和 5 ml 试剂 B），来制备 1X SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。混匀。
  3. 将底物与膜一起孵育 1 分钟，倒掉多余溶液（膜将保持湿润），然后包裹在塑料中并在 X 线胶片下曝光。

* 避免反复接触皮肤。

发布​于 2005 年 6 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号：10

免疫组织化学（石蜡）

A. 溶液和试剂

  1. 二甲苯
  2. 乙醇，无水变性，组织学分级（100% 和 95%）
  3. 去离子水 (dH2O)
  4. Hematoxylin（可选）
  5. 洗涤缓冲液：
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液：要制备 1L 1X TBST，添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
    2. 抗体稀释剂 TBST/5% Normal Goat Serum：向 5 mL 1X TBST 中添加 250 µl Normal Goat Serum #5425)。
  6. 1X 柠檬酸盐修复液：要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液，将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  7. 3% 过氧化氢：要制备，添加10 ml 30% H2O2至90 ml dH2O 中。
  8. 封闭液：TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum：要制备 5 ml 1X TBST，添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：要制备 4 mL of dH2O，添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  9. 检测系统： VECTASTAIN® Elite ABC，包括生物素化二抗 (Vector Laboratories)。
  10. 底物：Vector® NovaRED™ (Vector Laboratories)。
  11. 苏木精： Hematoxylin (#14166)。
  12. 封片剂： SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意：在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐：将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液，再放入微波炉中加热直至沸腾；继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3% 过氧化氢水溶液中，孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 在每个切片上滴加 100–400 µl 首选封闭液，在室温下封闭 1 小时。
  6. 清除封闭液，然后每个切片加入用推荐的抗体稀释剂稀释的 100–400 µl 的一抗。4°C 温度下孵育过夜。
  7. 根据制造商建议说明制备 ABC 溶液。
  8. 清除一抗，用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  9. 将每个切片中添加 100-400 µl 生物素化二抗（根据制造商建议在 TBST 中进行稀释）。在室温孵育 30 分钟。
  10. 清除二抗溶液，用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  11. 按需使用 100-400 µl 预混合 ABC 溶液覆盖切片，并在湿盒中室温孵育 30 分钟。
  12. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  13. 根据制造商建议说明制备 Vector® NovaRED™。
  14. 在每张切片上应用 100–400 µl 底物并密切观察，通常 1-10 分钟即可得到合适的染色强度。
  15. 如果需要，使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  16. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  17. 使切片脱水：
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
  18. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂		 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653
兼容的
色原		 SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632  

注意：使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗，考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​于 2005 年 6 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号：310

特异性/敏感性

Phospho-ATF-2 (Thr69/71)/ATF-7 (Thr51/53) 抗体 仅在 Thr69 和 Thr71 双磷酸化后可检测内源水平的 ATF-2，仅在 Thr51 和 Thr53 双磷酸化时检测 ATF-7。它不能识别 Thr69 或 Thr71 单磷酸化的 ATF-2，也不能识别在 Thr51 或 Thr53 位点单磷酸化的 ATF-7。

物种反应性：

人, 小鼠, 大鼠, 猴

来源/纯化

使用与人 ATF-2 的 Thr69 和 Thr71 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。

背景

转录因子 ATF-2（也被称为 CRE-BP1）结合 AP-1 和 CRE DNA 效应元件，同时也是亮氨酸拉链蛋白家族 ATF/CREB 的一员 (1)。ATF-2 与各种病毒癌蛋白以及细胞抑癌基因相互作用，并且是 SAPK/JNK 和 p38 MAP 激酶信号转导通路的靶标 (2-4)。各种细胞应激（包括基因毒剂、炎性细胞因子和紫外辐射）都能刺激 ATF-2 的转录活性。细胞应激通过在 Thr69 和 Thr71 的磷酸化激活 ATF-2 (2-4)。在体内和经 ATF-2 转染的细胞内，SAPK 和 p38 MAPK 能在这些位点磷酸化 ATF-2。这些位点的突变导致应激诱导的 ATF-2 转录缺失 (2-4)。此外，这些位点的突变会降低 E1A 和 Rb 通过ATF-2 刺激基因表达的能力 (2)。

ATF-7 是亮氨酸拉链蛋白(5) ATF/CREB 家族的另一个成员 。与之相似，Thr51 和 Thr53（分别对应 ATF-2 的 Thr69 和 Thr71）可在不同条件下被磷酸化(6, 7)。

  1. Abdel-Hafiz, H.A. et al. (1992) Mol Endocrinol 6, 2079-89.
  2. Gupta, S. et al. (1995) Science 267, 389-93.
  3. van Dam, H. et al. (1995) EMBO J 14, 1798-811.
  4. Livingstone, C. et al. (1995) EMBO J 14, 1785-97.
  5. Peters, C.S. et al. (2001) J Biol Chem 276, 13718-26.
  6. Camuzeaux, B. et al. (2008) J Mol Biol 384, 980-91.
  7. Maekawa, T. et al. (2010) EMBO J 29, 196-208.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意，否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件，除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受， 否书均被拒书，并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明， 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的， 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专，且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的， 或专专售（专独或作专专成）或其他商专目的而专专专品，均需要 CST 的专独专可。客专：(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品，或使用专品制造任何商专专品，(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专，或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专， (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专，(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品， (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SignalStain 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Tween 是 ICI Americas, Inc. 的注册商标。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink