反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 160 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人
小鼠, 大鼠
使用与人 AS160 的 Thr642 周围序列相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白质 A 和肽亲和色谱纯化抗体。
胰岛素是控制关键的能量功能(如葡萄糖和脂质代谢)的一种主要激素。胰岛素能结合并激活胰岛素受体(IR)酪氨酸激酶,能够募集并磷酸化各种接头蛋白。胰岛素及其受体能启动的信号转导通路,并且可通过 GLUT4 葡萄糖转运体从细胞浆转位至质膜刺激肌肉细胞和脂肪细胞葡萄糖摄取。(1)。Akt 丝氨酸/苏氨酸激酶(AS160,TBC1D4)的一个160 kDa 的底物是 Rab GTP 酶激活的蛋白,它能调节胰岛素刺激的 Glut4 转运。AS160 可在许多组织中表达,包括脑、肾、肝、棕色和白色脂肪组织 (2)。体内在 AS160 发现多个 Akt 磷酸化位点,在胰岛素处理后,这五个位点(Ser318、Ser570、Ser588、Thr642、Thr751)的磷酸化增加 (2,3)。使用重组 AS160 的研究表明,胰岛素刺激的 AS160 磷酸化 是 Glut4 转位 (3) 的一个关键步骤,并且在一些2 型糖尿病患者中减少 (4)。14-3-3 调节蛋白和在 Thr642 位点被磷酸化的 AS160 之间的相互作用是 Glut4 转位的一个必要步骤 (5)。AMPK 对 AS160 的磷酸化作用也参与浓度诱导的 Glut4 转位调控过程 (6)。
探索与本品相关的通路。
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