使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经(绿色)或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903(50 μM、1 μM 和 10 μM,2 小时;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
使用与非特异性阴性对照抗体(红色)相对比的 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb(蓝色)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
使用 Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody (上图)或总 c-Raf antibody(下图)对未经处理或已经 TPA 处理的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb 对未处理的(蓝色)或经 PDGF 处理(绿色)的 NIH/3T3 细胞进行流式细胞术分析。
使用 Phospho-PTEN (Ser380) Antibody (上图)或 PTEN Antibody #9552(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性通过在蛋白质印迹转移后用牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 处理膜来确定。
使用 Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb (上图)和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下图)对 PC3 细胞、HCT116 野生型和 HCT116 PDK1 -/- 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。(HCT116 野生型和 HCT116 PDK1 -/- 细胞由美国马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学的 Bert Vogelstein 博士惠赠)。
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® 兔单克隆抗体(实线)对未经(绿色)或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903(蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(绿色),对经 LY294002 处理(左)或经胰岛素处理(右)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084(DNA 荧光染料)。
使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb(绿色)对 C2C12 细胞(LY294002 处理(左)或胰岛素处理(右))进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5™(DNA 荧光染料)。
Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody 的位点特异性:使用 Phospho-Raf (Ser259) Antibody 或 Myc 抗体对带有 Myc 标签的野生型(泳道 1 和 3)和 S259A 突变体(泳道 2 和 4)重组 c-Raf 蛋白进行蛋白质印迹分析。(由麻省总医院的 Guri Tzivion 博士惠赠。)
使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb(绿色)对未处理(左)的、经 LY294002 和渥曼青霉素处理(分别为 #9901 和 #9951;中心)或经 λ 磷酸酶处理(右)的野生型小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)(顶排)、GSK-3β (-/-) MEF(中间排)或 PC-3 细胞(底排)进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。(MEF 野生型和 GSK-3β (-/-) 细胞由加拿大多伦多大学的 Jim Woodgett 博士友情提供)。
使用 Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb (上图)、PDK1 Antibody #3062(中间)或 Akt Antibody #9272(下图)对未经处理或已经 λ-磷酸酶处理的 PC3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (绿色)对经胰岛素(100 nM,15 分钟;左图)或 LY294002 #9901(50 μM,2 小时;右图)处理的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(左)或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559(右),对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意:PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。
使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb(上)和 α/β-Tubulin Antibody #2148(下)对经 λ 磷酸酶或 PDGF 处理的 GSK-3α (-/-)(泳道 1,2)和 GSK-3β (-/-)(泳道 3,4)小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹法分析。(野生型 MEF、GSK-3α (-/-) 和 GSK-3β (-/-) 细胞由加拿大多伦多大学的 Jim Woodgett 博士友情提供)。
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (泳道 3)对 Jurkat 细胞提取物磷酸 Akt (Thr308) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060,对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112(左)和 TBST/5% Normal Goat Serum(右)对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
在对照肽(左)或 Akt (pan) Blocking Peptide #1085(右)存在下,使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb(上)或 GSK-3β (27C10) Rabbit mAb #9315(下)对未处理的或经 LY294002/渥曼青霉素处理的 PC-3 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb(上图)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下图)对未经处理 (-) 或已经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913(100 ng/ml,5 分钟;+)处理的 NIH/3T3 细胞与未经处理的 (-) LNCaP 和 PC-3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 (石蜡包埋的 LNCaP 细胞(未处理(左)或 LY294002 处理(右)))上使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左)或经 LY294002 处理(右)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。
使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白及来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。(组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠)
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。
对经 Calyculin A #9902(100nM,30 分钟)处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb,泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。