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9916
Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit
一抗
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Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit #9916

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Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 1

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经（绿色）或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM、1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用与非特异性阴性对照抗体（红色）相对比的 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb（蓝色）对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody （上图）或总 c-Raf antibody（下图）对未经处理或已经 TPA 处理的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb 对未处理的（蓝色）或经 PDGF 处理（绿色）的 NIH/3T3 细胞进行流式细胞术分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用 Phospho-PTEN (Ser380) Antibody （上图）或 PTEN Antibody #9552（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性通过在蛋白质印迹转移后用牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 处理膜来确定。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb （上图）和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下图）对 PC3 细胞、HCT116 野生型和 HCT116 PDK1 -/- 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。（HCT116 野生型和 HCT116 PDK1 -/- 细胞由美国马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学的 Bert Vogelstein 博士惠赠）。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 7

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® 兔单克隆抗体（实线）对未经（绿色）或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 8

一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（绿色），对经 LY294002 处理（左）或经胰岛素处理（右）的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 10

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb（绿色）对 C2C12 细胞（LY294002 处理（左）或胰岛素处理（右））进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5™（DNA 荧光染料）。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 11

Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody 的位点特异性：使用 Phospho-Raf (Ser259) Antibody 或 Myc 抗体对带有 Myc 标签的野生型（泳道 1 和 3）和 S259A 突变体（泳道 2 和 4）重组 c-Raf 蛋白进行蛋白质印迹分析。（由麻省总医院的 Guri Tzivion 博士惠赠。）

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb（绿色）对未处理（左）的、经 LY294002 和渥曼青霉素处理（分别为 #9901 和 #9951；中心）或经 λ 磷酸酶处理（右）的野生型小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)（顶排）、GSK-3β (-/-) MEF（中间排）或 PC-3 细胞（底排）进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。（MEF 野生型和 GSK-3β (-/-) 细胞由加拿大多伦多大学的 Jim Woodgett 博士友情提供）。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb （上图）、PDK1 Antibody #3062（中间）或 Akt Antibody #9272（下图）对未经处理或已经 λ-磷酸酶处理的 PC3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb （绿色）对经胰岛素（100 nM，15 分钟；左图）或 LY294002 #9901（50 μM，2 小时；右图）处理的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（左）或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559（右），对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意：PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb（上）和 α/β-Tubulin Antibody #2148（下）对经 λ 磷酸酶或 PDGF 处理的 GSK-3α (-/-)（泳道 1,2）和 GSK-3β (-/-)（泳道 3,4）小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹法分析。（野生型 MEF、GSK-3α (-/-) 和 GSK-3β (-/-) 细胞由加拿大多伦多大学的 Jim Woodgett 博士友情提供）。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb （泳道 3）对 Jurkat 细胞提取物磷酸 Akt (Thr308) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060，对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112（左）和 TBST/5% Normal Goat Serum（右）对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 20

在对照肽（左）或 Akt (pan) Blocking Peptide #1085（右）存在下，使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb（上）或 GSK-3β (27C10) Rabbit mAb #9315（下）对未处理的或经 LY294002/渥曼青霉素处理的 PC-3 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb（上图）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下图）对未经处理 (-) 或已经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913（100 ng/ml，5 分钟；+）处理的 NIH/3T3 细胞与未经处理的 (-) LNCaP 和 PC-3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 24

在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 （石蜡包埋的 LNCaP 细胞（未处理（左）或 LY294002 处理（右）））上使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 25

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（未经处理（左）或经 LY294002 处理（右）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 26

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白及来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 27

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。（组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠）

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 30

对经 Calyculin A #9902（100nM，30 分钟）处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb，泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit: 图像 31

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（上）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下），对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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9916T		 1 个试剂盒(7 x 20 µl)

定制制剂

产品说明

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit 提供一种高性价比的方式来评估 Akt 信号转导通路的激活状态，包括 PTEN 和磷酸化的 Akt、GSK-3β、c-Raf 和 PDK1。该试剂盒包含足量的一抗和二抗，可进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

每种磷酸特异性抗体可识别其靶标的磷酸化形式。Akt Antibody 可识别在任何磷酸化状态下的 Akt 总蛋白。

来源/纯化

使用与人 Akt 的 Ser473 或 Thr308、人 GSK-3ß 的 Ser9、人 c-Raf 的 Ser259、人 PTEN 的 Ser380 或人 PDK1 的 Ser241 周围的残基相对应的合成磷酸肽对兔进行免疫接种来产生抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

背景

Akt 也称作 PKB 或 Rac，在控制存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活，并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ，以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ，它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标（包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和 caspase-9）而抑制凋亡，进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3 激酶/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外，Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和 cyclin D1 降解 (14)，并通过负向调节细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16)，参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR，在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是，Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)（在 mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子）(18,19)。

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通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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