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10396
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit
一抗
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Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit #10396

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Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060 对经过 Calyculin A（100 uM，30 分钟）处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 2
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb（实线）对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（绿色）或经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM，1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb，对来自不同细胞类型的提取物进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 Akt2 (D6G4) Rabbit mAb（上）和 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb #2938（下），对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（上）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下），对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白及来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 8
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (上图) 、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb #4060 (中图) 或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691 (下图) ，对未经处理 (-) 或经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913 (100ng/ml,15分钟 +) 处理的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 或 Akt2 (-/-) MEF 的提取物进行蛋白印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb （上图）、Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb #8599（上部第 2 张图）、Akt1 (C73H10) Rabbit mAb #2938（中图）、Akt2 (D6G4) Rabbit mAb #3063（下部第 2 张图）或 PI3 Kinase p85 (19H8) Rabbit mAb #4257（下图），对经表达 Akt1 shRNA 或 Akt2 shRNA 的构建体转染、未经诱导 (-) 或经强力霉素诱导指定次数的 LNCaP 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。 (感谢麻省波士顿贝斯以色列女执事医疗中心 (Beth Israel Deaconess Medical Center) 和哈佛医学院的 Rebecca Chin 博士及 Alex Toker 博士惠赠数据) 。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb（上）和 Akt2 Antibody #2962 （下），对来自 Akt1 敲除（泳道 1）、Akt2 敲除（泳道 2）和 Akt3 敲除（泳道 3）小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 和匹配的野生型 MEF（泳道 4）的提取物进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 12
对经 Calyculin A #9902（100nM，30 分钟）处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb，泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb #9018（上图）、Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb（上部第 2 张图）、Akt1 (C73H10) Rabbit mAb #2938（中图）、Akt2 (D6G4) Rabbit mAb #3063（下部第 2 张图）或 PI3 Kinase p85 (19H8) Rabbit mAb #4257（下图），对转染 Akt1 shRNA 或 Akt2 shRNA 表达载体、未经诱导 (-) 或经强力霉素诱导指定次数的 LNCaP 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。 (感谢麻省波士顿贝斯以色列女执事医疗中心 (Beth Israel Deaconess Medical Center) 和哈佛医学院的 Rebecca Chin 博士及 Alex Toker 博士惠赠数据) 。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb（上图）、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb #4060（中图）和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下图），对纯化的重组磷酰-Akt1 蛋白、磷酰-Akt2 蛋白及 磷酰-Akt3 蛋白进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb（上）和 Akt (pan) (11E7) Rabbit mAb #4685（下），对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（左）或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559（右），对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意：PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 18
在对照肽（左）或 Akt (pan) Blocking Peptide #1085（右）存在下，使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb（上图）、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060（中图）及 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下图）对纯化重组 phospho-Akt1、phospho-Akt2 及 phospho-Akt3 蛋白进行蛋白质印迹法分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 20
使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb （上图）、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb #4060（中图）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下图），对未经处理或经 hPDGF #8913（100 ng/ml，15 分钟）刺激的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 或 Akt2 (-/-) MEF 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060，对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112（左）和 TBST/5% Normal Goat Serum（右）对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 22
在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 （石蜡包埋的 LNCaP 细胞（未处理（左）或 LY294002 处理（右）））上使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 23
使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb（绿色）对经 hPDGF #8913（100 ng/ml，15 分钟）刺激（上行）或经 LY294002 #9901 抑制（下行）的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)（左列）或 Akt2 (-/-) MEF（右列）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb（绿色）对 C2C12 细胞（LY294002 处理（左）或胰岛素处理（右））进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5™ （DNA 荧光染料）。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 26
在 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（未经处理（左图）或经过 LY294002 处理（右图）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）上使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 27
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。（组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠）
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 29
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 30
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（绿色），对经 LY294002 处理（左）或经胰岛素处理（右）的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（绿色）或已经过 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM，1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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To Purchase # 10396T
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10396T		 1 个试剂盒（6 x 20 微升）

定制制剂

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 4060 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
 H M R Hm Mk Dm Z B 60 兔 IgG
Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 4691 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
 H M R Mk Dm 60 兔 IgG
Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb 9018 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
 H M R 60 兔 IgG
Akt1 (C73H10) Rabbit mAb 2938 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb 8599 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R 60 兔 IgG
Akt2 (D6G4) Rabbit mAb 3063 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 60 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 

产品说明

Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit 为您提供了一种经济的手段以磷酸化特异的及对照抗体检测 Akt 家族成员的激活。该试剂盒含有足量的一抗，每种抗体至少可进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/灵敏度

试剂盒中每个抗体可识别其内标水平的总特异性靶标蛋白。Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 不会与其他相关蛋白发生交叉反应。Akt1 (C73H10) Rabbit mAb 不与 Akt2 或 Akt3 交叉反应。Akt2 (D6G4) Rabbit mA 不与 Akt1 或 Akt3 交叉反应。Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb 检测仅在 Ser473 磷酸化后的内源水平的 Akt。Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) 仅在 Ser473 位点磷酸化后可识别内源水平的 Akt1 蛋白。不能检测 Ser474 位点磷酸化的 Akt2 蛋白。Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific) 仅在 Ser474 磷酸化后可识别内源水平的 Akt2 蛋白。该抗体不与 Ser473 磷酸化的 Akt1 蛋白或 Ser472 磷酸化的 Akt3 蛋白发生交叉反应。

来源/纯化

使用与人 Akt 中 Ser473 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb。使用与小鼠 Akt 羧基末端序列残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb。使用与人 Akt1 蛋白 Ser473 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb (Akt1 Specific)。通过采用人 Akt1 的 Leu110 周围的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb 单克隆抗体。使用与人 Akt2 蛋白 Ser474 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生 Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific)。通过采用与人 Akt2 的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Akt2 (D6G4) Rabbit mAb。

背景

Akt 也称作 PKB 或 Rac，在控制存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活，并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ，以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ，它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标（包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和 caspase-9）而抑制凋亡，进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3K/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外，Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和周期蛋白 D1 降解 (14) 并通过负向调节周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16) 来参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR，在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是，Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)（在 mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子）(18,19)。

在哺乳动物中，有 3 种 Akt 同工型（Akt1、Akt2 和 Akt3）(20)。Akt 激活需要 mTORC2 磷酸化 Akt1 Ser473、Akt2 Ser474 和 Akt3 Ser472 (20)。
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  6. Jacinto, E. et al. (2006) Cell 127, 125-37.
  7. Cardone, M.H. et al. (1998) Science 282, 1318-21.
  8. Brunet, A. et al. (1999) Cell 96, 857-68.
  9. Zimmermann, S. and Moelling, K. (1999) Science 286, 1741-4.
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  18. Inoki, K. et al. (2002) Nat Cell Biol 4, 648-57.
  19. Manning, B.D. et al. (2002) Mol Cell 10, 151-62.
  20. Manning, B.D. and Toker, A. (2017) Cell 169, 381-405.

通路

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