反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 450 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人
猴
使用与人 53BP1 中 Thr543 周围的残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对抗体进行纯化。
P53-结合蛋白 1 (53BP1) 初步鉴定为可增强 p53 转录活性的 p53 结合配偶体 (1,2)。53BP1 包括两个与 p53 结合的 BRCA1 羧基末端 (BRCT) 结构域和一个负责与磷酸化组蛋白 H2A.X 结合的独立结构域 (3)。使用可造成 DNA 双链断裂 (DSB) 的电离辐射 (IR) 或拟辐射剂处理细胞后,53BP1 迅速转位至细胞核聚集点 (4,5)。由于这种 DSB 定位及与酵母蛋白 Rad9 的同源性,已经有人提出 53BP1 在 DSB 修复中的作用。已经证实,募集 53BP1 至 DNA 损伤部位与 ATM、NBS1 和DNA-PK 无关 (4), 并且 53BP1 在 DNA 断口处停留需要磷酸化的 H2A.X (6)。在缺少 53BP1 的细胞中,ATM 底物的磷酸化出现减少,表明 53BP1 位于 ATM 的上游 (7)。经证实,53BP1 对 IR 做出反应,在丝氨酸 6、25、29 和 784 位点由 ATM 磷酸化,但是将 53BP1 定位至 DSB 位点不需要这些位点处的磷酸化 (6)。据报道,在有丝分裂停滞的人细胞中,多见 53BP1 在 Ser1618 处的磷酸化 (8)。
研究表明,53BP1 的苏氨酸 543 在 DNA 损伤后以 ATM/ATR 依赖的方式被磷酸化 (8,9)。
Phospho-53BP1 (Thr543) Antibody 针对一个在 Cell Signaling Technology (CST) 使用 PhosphoScan®(CST 用于检测修饰位点的 LC-MS/MS 平台)发现的位点。使用 ATM/ATR 底物抗体便可发现 Thr543 磷酸化,并且经证实紫外线处理会诱导 Thr543 磷酸化。如需了解更多信息,请在 www.phosphosite.org 访问 PhosphoSitePlus®,CST 修饰位点知识库。
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