产品货号 | 规格 | 价格 | 库存 |
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2675S | 100 µl |
为庆祝中国农历新年,我们的中国办事处将于2021年2月11日至2021年2月20日关闭。
感谢您的耐心等待。
反应性 | H Mk |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 450 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:100 |
流式细胞术 | 1:100 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布于 2006 年 11 月
修订于 2013 年 11 月
实验步骤编号:24
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。
注:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。
注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。
注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。
注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布于 2009 年 7 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:404
仅在 53BP1 在丝氨酸 1778 位点磷酸化后,Phospho-53BP1 (Ser1778) Antibody 方可识别 53BP1 的内源水平。
人, 猴
使用与人 53BP1 中 Ser1778 周围的残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。
P53-结合蛋白 1 (53BP1) 初步鉴定为可增强 p53 转录活性的 p53 结合配偶体 (1,2)。53BP1 包括两个与 p53 结合的 BRCA1 羧基末端 (BRCT) 结构域和一个负责与磷酸化组蛋白 H2A.X 结合的独立结构域 (3)。使用可造成 DNA 双链断裂 (DSB) 的电离辐射 (IR) 或拟辐射剂处理细胞后,53BP1 迅速转位至细胞核聚集点 (4,5)。由于这种 DSB 定位及与酵母蛋白 Rad9 的同源性,已经有人提出 53BP1 在 DSB 修复中的作用。已经证实,募集 53BP1 至 DNA 损伤部位与 ATM、NBS1 和DNA-PK 无关 (4), 并且 53BP1 在 DNA 断口处停留需要磷酸化的 H2A.X (6)。在缺少 53BP1 的细胞中,ATM 底物的磷酸化出现减少,表明 53BP1 位于 ATM 的上游 (7)。经证实,53BP1 对 IR 做出反应,在丝氨酸 6、25、29 和 784 位点由 ATM 磷酸化,但是将 53BP1 定位至 DSB 位点不需要这些位点处的磷酸化 (6)。据报道,在有丝分裂停滞的人细胞中,多见 53BP1 在 Ser1618 处的磷酸化 (8)。
在第一个 BRCT 结构域(氨基酸 1714-1850)中,有一个共有的 ATM/ATR 磷酸化位点 Ser1778。因此,Ser1778 磷酸化可能调节 53BP1 与 p53 的结合。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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