试剂盒使用信息
实验步骤
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3169: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法
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3397: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡)
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3751: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠)
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4060: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法, 流式细胞术
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4370: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法*, 流式细胞术
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4549: 蛋白印迹实验
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4691: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法, 流式细胞术
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4695: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法*, 流式细胞术
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7074: 蛋白印迹实验
产品说明
PDGF Receptor Activation Antibody Sampler Kit 提供一种高性价比的方式来评估 SHP-2、Akt 和 p44/42 MAPK (Erk1/2) 等许多 PDGF 受体通路成员的激活状态。试剂盒包含足量的抗体,每种一抗可以进行 2 次蛋白质印迹实验。
特异性/灵敏度
除非另有说明,否则 PDGF Receptor Activation Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可识别内源水平的特定靶标。激活状态的抗体可检测仅在指定位点磷酸化的特定靶标。Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 可识别内源水平的在 Erk1 的 Thr202 和 Tyr204 位点(Erk2 的 Thr185/Tyr187 位点)被双重磷酸化以及在 Thr202 位点被单磷酸化的 p44 和 p42 MAP 激酶。Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) (C63G6) Rabbit mAb 会与激活的 PDGF 受体 α 和其他高度过表达的蛋白酪氨酸激酶发生交叉反应。PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb 会与高度过表达的 PDGF 受体 α 发生交叉反应。Phospho-SHP-2 (Tyr542) Antibody 会与激活的受体酪氨酸激酶发生交叉反应。
来源/纯化
使用与人 SHP-2 蛋白中 Tyr542 周围的残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。使用与人 Akt 的 Ser473、人 p44 MAP 激酶的 Thr202/Tyr204 或人 PDGF 受体 β 的 Tyr751 周围的残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生活化状态的单克隆抗体。使用与小鼠 Akt 的羧基末端序列、大鼠 p44 MAP 激酶的羧基末端、人 SHP-2 中羧基末端周围残基相对应的合成肽或包含人 PDGF 受体 β 蛋白的羧基末端片段的融合蛋白对动物进行免疫接种来产生对照的单克隆抗体。
背景
血小板源性生长因子 (PDGF) 家族蛋白可形成二聚体(PDGF AA、PDGF AB、PDGF BB、PDGF CC 和 PDGF DD),这些二聚体可以特定方式结合受体酪氨酸激酶 PDGF 受体 α (PDGFRα) 和 PDGF 受体 β (PDGFRβ)。PDGFRβ 同型二聚体结合 PDGF BB 和 DD 同型二聚体以及 PDGF AB 异源二聚体。异聚体受体 PDGF α/β 结合 PDGF B、C 和 D 同型二聚体以及 PDGF AB 异源二聚体 (1)。结合配体会诱导 PDGF 受体二聚化和自磷酸化,随后结合和激活包含细胞浆 SH2 结构域的信号转导分子,如 GRB2、Src、GAP、PI3 激酶、PLCγ 和 NCK。激活的 PDGF 受体会启动调控细胞生长、肌动蛋白重组、迁移和分化的信号转导通路 (2)。PDGFRβ 激酶插入区域的残基 Tyr751 形成 PI3 激酶的锚定位点,并且 PDGFRβ 在该位点的磷酸化会抑制 PI3 激酶 p85 亚基的 SH2 结构域与 PDGFRβ 之间的结合 (3,4)。
SHP-2 (PTPN11) 是一种非受体蛋白酪氨酸磷酸酶,它参与可调控细胞生长、分化、迁移和死亡的信号转导通路 (5)。SHP-2 的激活以及与 Gab1 的结合对生长因子受体和细胞因子下游的 Erk 持续激活非常关键 (6)。在生长因子受体激活后,SHP-2 在 Tyr542 和 Tyr580 位点的磷酸化被认为可解除基本抑制,并刺激 SHP-2 酪氨酸磷酸酶活性 (7,8)。
胰岛素和不同的生长/存活因子会激活 Akt,Akt 是一种在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用的激酶,有助于调控细胞存活和凋亡 (9-11)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (12) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。
丝裂原、生长因子和细胞因子等胞外刺激因素都会激活 p44/42 MAPK (Erk1/2) 信号转导通路 (13-15)。研究表明,这个通路是癌症诊治的一个重要靶标 (16)。外部刺激会激活激酶级联,从而使 MAP 激酶激活 p44 和 p42。MEK1 和 MEK2 通过分别使活化环残基 Thr202/Tyr204 和 Thr185/Tyr187 磷酸化,从而激活 p44 和 p42。
临床研究发现 PDGF 在成胶质细胞瘤、前列腺癌等许多不同实体瘤的细胞中表达。在这些肿瘤中,PDGF 信号转导的生物学作用从癌细胞生长的自分泌刺激变成与周围基质甚至是血管生成有关的更为轻微的旁分泌相互作用。靶向 PDGF 信号转导可能是肿瘤治疗的一种有效方式 (17)。
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通路与蛋白质
探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。
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