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98303
Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit #98303

引用 (0)
Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 1

对 J774A.1 细胞提取物的 Gasdermin D 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb。使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经 (-) 或经Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时;+)处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419(15 μM,指定时间;+)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白质印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对未经处理 (-) 或经 LPS 处理(1 μg/ml,过夜;+)的 Raw264.7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 4

对经 LPS #14011(50 ng/ml,4 小时)处理,然后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的培养基提取物中剪切活化的 IL-1β (Asp117) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 为 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)。使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)进行蛋白印迹实验。抗兔 IgG, HRP-链接抗体 #7074 用作二抗。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 5

对 EL4 细胞提取物 Caspase-1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input对照,泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 为 Caspase-1 (E2Z1C) 兔单克隆抗体。使用 Caspase-1 (E2Z1C) 兔单克隆抗体 进行蛋白印迹实验。小鼠抗兔 IgG (构象特异) (L27A9) 单克隆抗体 (HRP 偶联物) #5127 用作二抗。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 6

对经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50ng/ml,4 小时)处理,然后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞的丙酮沉淀培养基提取物的 Cleaved Caspase-1 (Asp296) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照3900,泳道 3 为Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) 兔单克隆抗体。使用 Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) 兔单克隆抗体 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Caspase-11 (17D9) Rat mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对未处理 (-) 或用 LPS(1 μg/ml,过夜;+)处理的 Raw 264.7 细胞或 J774.1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠)(实线)或浓度匹配的 兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900(虚线)对 Raw264.7 细胞(蓝色)和 J774A.1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠肺进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 10

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对对照小鼠骨髓衍生的巨噬细胞(泳道 1)或 Gasdermin D 基因剔除小鼠(泳道 2) mBMDM 的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 基因敲除细胞中无信号证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。来自 Gasdermin D 基因敲除小鼠的 mBMDM 由马萨诸塞州大学伍斯特分校马萨诸塞大学医学院的 Douglas Golenbock 博士提供。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对 Mouse Interleukin-1β (mIL-1β) #5204 进行蛋白质印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (D7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)(上图)或总 IL-1β (D3H1Z) 兔单克隆抗体(特定小鼠)#12507(下图)对未经 (-) 或已经 LPS #14011(50 ng/ml,4 小时)处理后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理 (+) 的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的细胞提取物和培养基进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Caspase-1 (E2Z1C) 兔单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) 兔单克隆抗体(上)或 Caspase-1 (E2Z1C) 兔单克隆抗体(下), 对未经处理 (-) 或已经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时)处理,然后使用 Nigericin处理(15 μM,45 分钟)(+) 的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的细胞或培养基提取物进行蛋白质印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 16

对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。切片先用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) #67824(绿色)和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450(黄色)标记。用小鼠 (G3A1) 单克隆抗体 IgG1 同型对照 #5415 封闭游离二抗结合位点之后,切片用 GFAP (GA5)小鼠单克隆抗体(Alexa Fluor® 647 偶联物)#3657(红色)孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082(蓝色)标记。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174 (下图)对对照 PC-3 细胞(泳道 1)或 Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。Gasdermin D 敲除型 PC-3 细胞中没有信号,这证实了抗体对 Gasdermin D 的特异性。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Caspase-1 (E2Z1C) 兔单克隆抗体 对未经 (-) 或已经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时)处理后再用 Nigericin(15 μM,45 分钟)(+) 处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的细胞提取物或培养基进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) 兔单克隆抗体(上)、Caspase-1 (E2Z1C) 兔单克隆抗体(中)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457 (下)进行的 A20 、EL4 和 M1 细胞系的蛋白质印迹分析。使用 Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) 兔单克隆抗体 在这些细胞系中未能染色,表明它不会与全长 caspase-1 发生交叉反应。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠)(绿色)对未经(左上图)或已经 LPS(50 ng/ml,4 小时,中间)处理或已经 LPS 处理后再用 ATP(5 mM,45 分钟,右上图)处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 与 J774A.1(左下图)或 Raw 264.7(右下图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。注意,经过LPS 和 ATP(白色箭头)刺激后,ASC 会转位至炎症小体。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)、Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb #10137(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经 (-) 或经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时;+)处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419(15 μM,指定时间)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 24

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的 J774A.1 细胞沉淀物(左图,阳性)或 RAW 264.7 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 25

使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人体前列腺癌进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 26

使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对不同细胞系提取物进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 27

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠前胃进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb,对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带有 Myc/DDK 标签的全长小鼠 Gasdermin D 蛋白 (mGSDMD-Myc/DDK; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 30

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠大脑进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 31

使用 Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb(上图)、Cleaved Gasdermin D (Asp275) (E7H9G) Rabbit mAb #36425 (中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对通过 TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate) #4174 分化(50 ng/ml,过夜)然后经过脂多糖 (LPS) #14011 处理 (5 μg/ml,6 小时)的 THP-1 细胞提取物进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 32

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)作为对照,使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)(左图)对石蜡包埋的小鼠结肠进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 33

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠胸腺进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 34

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 35

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的 Renca 同系肿瘤(左上图)、4T1 同系乳腺肿瘤(右上图)、Renca 细胞沉淀物(左下图)和 4T1 细胞沉淀物(右下图)进行免疫组织化学分析。两种肿瘤均显示浸润的免疫细胞染色。请注意,Renca 肿瘤细胞中存在染色,而 4T1 肿瘤细胞中没有染色,这与相应细胞沉淀的染色结果一致。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 36

对 J774A.1 细胞提取物 ASC/TMS1 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 ASC (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)。使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体(特定小鼠)进行蛋白印迹分析。

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit: 图像 37

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体(特定小鼠)(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对 J774A.1 和 Raw 264.7 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

购买 # 98303T
产品货号 规格 价格 库存
98303T
1 个试剂盒(9 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 39754 20 µl
  • WB
  • IP
H M R 53, 30 兔 IgG
Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 10137 20 µl
  • WB
M 31 兔 IgG
IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 12507 20 µl
  • WB
M 17,31 兔 IgG
Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb (Mouse Specific) 63124 20 µl
  • WB
  • IP
M 17 兔 IgG
Caspase-1 (E2Z1C) Rabbit mAb 24232 20 µl
  • WB
  • IP
M 48, 10 兔 IgG
Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb 89332 20 µl
  • WB
  • IP
M 22 兔 IgG
Caspase-11 (17D9) Rat mAb 14340 20 µl
  • WB
  • IP
M 38, 43 大鼠 IgG2a
ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 67824 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
M 22 兔 IgG
HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb 6893 20 µl
  • WB
  • IHC
H M R Mk 29 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测用于读取细胞焦亡的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 可检测 Gasdermin D 总蛋白的内源水平。该抗体可识别在 caspase-1 热解过程中产生的 30 kDa 氨基末端片段。仅当在 Asp276 位点裂解时,Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 才可检测小鼠 Gasdermin D 蛋白的内源水平。Caspase-1(E2Z1C)Rabbit mAb 检测 pro-caspase-1 和活化 caspase-1 p10 亚基的内源水平。Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb 仅在 Asp296 位点裂解时可检测 caspase-1 蛋白的内源水平。在某些细胞中于 70kDa 处检测到一条非特异性条带。IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测小鼠 IL-1β 总蛋白的内源水平。这种抗体可检测到 500pg 的重组成熟小鼠 IL-1β。Cleaved IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测仅在 Asp117 位点被裂解活化的小鼠 IL-1β 蛋白的内源水平。Caspase-11 (17D9) Rat mAb 可识别Caspase-11 总蛋白的内源水平。ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测小鼠 ASC/TMS1 总蛋白的内源水平。HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb 可检测总 HMGB1 的内源水平。它不会与其他 HMGB 蛋白发生交叉反应,包括 HMGB2 和 HMGB3。

来源/纯化

通过对与小鼠 Gasdermin D 的 Leu60、小鼠 IL-1β 的 His124、人 HMGB1 的 Ala137、小鼠 caspase-11 羧基末端附近的肽、对小鼠 caspase-11 的 p30 亚基有特异性的重组片段以及对小鼠 ASC/TMS1 蛋白具有特异性的重组片段周围残基相对应的合成肽对免疫动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 caspase-1 的 Asp296、小鼠 IL-1β 的 Asp117 以及小鼠 Gasdermin D 蛋白的 Asp276 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

细胞焦亡是细胞死亡的一个受调控通路,具有坏死的形态特征,包括细胞肿胀、质膜孔隙形成以及炎性反应参与并释放多种损伤相关分子模式 (DAMP),例如 HMGB1 与 IL-1β 和 IL-18 等炎性细胞因子 (1,2)。在有微生物病原体表达的病原体相关分子模式 (PAMP) 或细胞源性 DAMP 时,天然免疫系统的细胞(例如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞)中通常会诱发细胞凋亡。诱发 caspase-1 蛋白水解激活的炎性体在组装后,会裂解 IL-1β 和 IL-18 等炎性细胞因子成为成熟形式,进而诱导细胞焦亡 (3)。细胞焦亡的一个关键特征是 Gasdermin D 被 caspase-1 和小鼠 caspase-11(或人 caspase-4/5)裂解 (4-6)。裂解时,Gasdermin D 的氨基末端片段低聚化形成一个允许分泌炎性 DAMP 和细胞因子的孔隙。典型的炎性体装配通常包含一个胞质模式识别受体 (PRR;一个核苷酸结合结构域和亮氨酸富集重复序列 [NLR] 或 AIM2 样家族成员)、一个接头蛋白 (ASC/TMS1) 和 pro-caspase-1。不同炎性体复合体可检测诱发细胞焦亡的不同 PAMP 和 DAMP。NLR 和 NLRP3 诱发的最具特征性的通路通过一个两步骤的过程发生。第一步是一个引发信号,NF-κB 被激活后会诱导一些炎性体组分的表达,包括 NLRP3、pro-IL-1β 和 pro-IL-18。在第二个激活步骤中,caspase-1 被激活且 Gasdermin D 和细胞因子通过蛋白水解被激活。在非典型通路中,caspase-4 和 caspase-5 会在 LPS 刺激后直接诱发单核细胞中的 Gasdermin D 裂解 (5,7)。

  1. Frank, D. and Vince, J.E. (2019) Cell Death Differ 26, 99-114.
  2. Shi, J. et al. (2017) Trends Biochem Sci 42, 245-54.
  3. Malik, A. and Kanneganti, T.D. (2017) J Cell Sci 130, 3955-63.
  4. He, W.T. et al. (2015) Cell Res 25, 1285-98.
  5. Shi, J. et al. (2015) Nature 526, 660-5.
  6. Kayagaki, N. et al. (2015) Nature 526, 666-71.
  7. Viganò, E. et al. (2015) Nat Commun 6, 8761.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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