试剂盒使用信息
实验步骤
6893: 蛋白印迹实验 , 免疫组织化学(石蜡)
7074: 蛋白印迹实验
10137: 蛋白印迹实验
12507: 蛋白印迹实验
14340: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
24232: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(磁珠)
39754: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
63124: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
67824: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖) , 免疫组织化学(石蜡) , 免疫荧光法 , 免疫荧光法 , 流式细胞术
89332: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
产品说明
Mouse Reactive Pyroptosis Antibody Sampler Kit 提供一种经济的方法来检测用于读取细胞焦亡的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。
特异性/灵敏度
Gasdermin D (E9S1X) Rabbit mAb 可检测 Gasdermin D 总蛋白的内源水平。该抗体可识别在 caspase-1 热解过程中产生的 30 kDa 氨基末端片段。仅当在 Asp276 位点裂解时,Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 才可检测小鼠 Gasdermin D 蛋白的内源水平。Caspase-1(E2Z1C)Rabbit mAb 检测 pro-caspase-1 和活化 caspase-1 p10 亚基的内源水平。Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb 仅在 Asp296 位点裂解时可检测 caspase-1 蛋白的内源水平。在某些细胞中于 70kDa 处检测到一条非特异性条带。IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测小鼠 IL-1β 总蛋白的内源水平。这种抗体可检测到 500pg 的重组成熟小鼠 IL-1β。Cleaved IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测仅在 Asp117 位点被裂解活化的小鼠 IL-1β 蛋白的内源水平。Caspase-11 (17D9) Rat mAb 可识别Caspase-11 总蛋白的内源水平。ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 可检测小鼠 ASC/TMS1 总蛋白的内源水平。HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb 可检测总 HMGB1 的内源水平。它不会与其他 HMGB 蛋白发生交叉反应,包括 HMGB2 和 HMGB3。
来源/纯化
通过对与小鼠 Gasdermin D 的 Leu60、小鼠 IL-1β 的 His124、人 HMGB1 的 Ala137、小鼠 caspase-11 羧基末端附近的肽、对小鼠 caspase-11 的 p30 亚基有特异性的重组片段以及对小鼠 ASC/TMS1 蛋白具有特异性的重组片段周围残基相对应的合成肽对免疫动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 caspase-1 的 Asp296、小鼠 IL-1β 的 Asp117 以及小鼠 Gasdermin D 蛋白的 Asp276 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
背景
细胞焦亡是细胞死亡的一个受调控通路,具有坏死的形态特征,包括细胞肿胀、质膜孔隙形成以及炎性反应参与并释放多种损伤相关分子模式 (DAMP),例如 HMGB1 与 IL-1β 和 IL-18 等炎性细胞因子 (1,2)。在有微生物病原体表达的病原体相关分子模式 (PAMP) 或细胞源性 DAMP 时,天然免疫系统的细胞(例如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞)中通常会诱发细胞凋亡。诱发 caspase-1 蛋白水解激活的炎性体在组装后,会裂解 IL-1β 和 IL-18 等炎性细胞因子成为成熟形式,进而诱导细胞焦亡 (3)。细胞焦亡的一个关键特征是 Gasdermin D 被 caspase-1 和小鼠 caspase-11(或人 caspase-4/5)裂解 (4-6)。裂解时,Gasdermin D 的氨基末端片段低聚化形成一个允许分泌炎性 DAMP 和细胞因子的孔隙。典型的炎性体装配通常包含一个胞质模式识别受体 (PRR;一个核苷酸结合结构域和亮氨酸富集重复序列 [NLR] 或 AIM2 样家族成员)、一个接头蛋白 (ASC/TMS1) 和 pro-caspase-1。不同炎性体复合体可检测诱发细胞焦亡的不同 PAMP 和 DAMP。NLR 和 NLRP3 诱发的最具特征性的通路通过一个两步骤的过程发生。第一步是一个引发信号,NF-κB 被激活后会诱导一些炎性体组分的表达,包括 NLRP3、pro-IL-1β 和 pro-IL-18。在第二个激活步骤中,caspase-1 被激活且 Gasdermin D 和细胞因子通过蛋白水解被激活。在非典型通路中,caspase-4 和 caspase-5 会在 LPS 刺激后直接诱发单核细胞中的 Gasdermin D 裂解 (5,7)。
Frank, D. and Vince, J.E. (2019) Cell Death Differ 26, 99-114.
Shi, J. et al. (2017) Trends Biochem Sci 42, 245-54.
Malik, A. and Kanneganti, T.D. (2017) J Cell Sci 130, 3955-63.
He, W.T. et al. (2015) Cell Res 25, 1285-98.
Shi, J. et al. (2015) Nature 526, 660-5.
Kayagaki, N. et al. (2015) Nature 526, 666-71.
Viganò, E. et al. (2015) Nat Commun 6, 8761.
通路与蛋白质
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蛋白质:P09429
蛋白质:P10749
蛋白质:P29452
蛋白质:P70343
蛋白质:Q9D8T2
蛋白质:Q9EPB4
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