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49938
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit
一抗
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Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit #49938

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使用 HP1 α (C7F11) Rabbit mAb，对来自 HeLa 细胞、NIH/3T3 细胞、C6 细胞和 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对 Raji（人）、BaF3（小鼠）和 C6（大鼠）细胞系裂解物进行蛋白质印迹分析。
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使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D11A13) XP® Rabbit mAb （上）或 Aurora B/AIM1 Antibody #3094（下），对 HeLa、L929 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析，三种细胞用 4 mM 的羟基脲处理 20 小时以诱导 G1/S 期，或用 100 nM paclitaxel 或100 ng/ml nocodazole 处理 20 小时以诱导 G2/M 期。
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使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对来自 Baf3、32D 和小鼠脾的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
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使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体（特定小鼠）（上图）或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对 J774A.1 和 Raw 264.7 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
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一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb（绿色）对 P21 小鼠脑的脑室区细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 554 phalloidin #13054（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
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使用 HP1 α (C7F11) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析，并显示核定位。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb #2808 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125，对使用 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® Survivin siRNA II (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 确认存活素表达的沉默，α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 用于存活素 siRNA 上样和特异性控制。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb（绿色）、 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116（红色）和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706（蓝色），对 HT-1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对 HeLa 细胞裂解物中的 MCM2 进行免疫沉淀，接着用相同的抗体对其进行蛋白质印迹分析。泳道 1 是 5% 输入对照。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠脾进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 14
对 J774A.1 细胞提取物 ASC/TMS1 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 ASC (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)。使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体（特定小鼠）进行蛋白印迹分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 16
在对照肽（左）或 HP1 α 封闭肽 #1004（右）存在的情况下，使用 HP1 α (C7F11) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人膀胱移行上皮癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 18
使用与碘化丙啶（DNA 含量）相对比的 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb，对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。框内细胞群表明 phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) 阳性细胞。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 20
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的 LL2 同基因的肿瘤进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的 J774A.1 细胞沉淀物（左图，阳性）或 RAW 264.7 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb 和 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 23
使用 HP1α (C7F11) Rabbit mAb（绿色），对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb #2808 对石蜡包埋的人肺癌（显示胞核定位）进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 26
对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。首先用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)（绿色）和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450（黄色）标记切片。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后，切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657（红色）孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082（蓝色）标记。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 27
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠前胃进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 28
在对照肽（左）或 Survivin Blocking Peptide #1037（右）存在的情况下，使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 29
使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类小肠进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 30
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)（绿色）对 32D 细胞（左图）和 C2C12 细胞（右图）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠大脑进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 32
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人垂体腺瘤进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 33
使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 34
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对 NIH/3T3 细胞（红色）和 32D 细胞（蓝色）进行流式细胞分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 35
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）作为对照，使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)（左图）对石蜡包埋的小鼠结肠进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 36
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对显示胞核定位的冰冻 H1650 异种移植物进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 37
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 HT-1080 细胞（经 50 ng/ml 的 IFN-γ 处理 30 分钟）中提取的交联染色质，在加入 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后， 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148、 人类 IRF-1 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 的方法对富集的 DNA 进行定量。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 38
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠胸腺进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 39
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。已用 MitoTracker® Red CMXRos（红色）标记线粒体。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 40
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 41
使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb（蓝色），且对照非特异性阴性对照抗体（红色），对未处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 42
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的 Renca 同系肿瘤（左上图）、4T1 同系乳腺肿瘤（右上图）、Renca 细胞沉淀物（左下图）和 4T1 细胞沉淀物（右下图）进行免疫组织化学分析。两种肿瘤均显示浸润的免疫细胞染色。请注意，Renca 肿瘤细胞中存在染色，而 4T1 肿瘤细胞中没有染色，这与相应细胞沉淀的染色结果一致。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 43
对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。切片先用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) #67824（绿色）和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450（黄色）标记。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后，切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657（红色）孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082（蓝色）标记。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 44
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠)（绿色）对未经（左上图）或已经 LPS（50 ng/ml，4 小时，中间）处理或已经 LPS 处理后再用 ATP（5 mM，45 分钟，右上图）处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 与 J774A.1（左下图）或 Raw 264.7（右下图）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。注意，经过LPS 和 ATP（白色箭头）刺激后，ASC 会转位至炎症小体。
Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 45
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP®Isotype Control #3900（虚线）对 Raw264.7 细胞（蓝色）和 J774A.1 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor®488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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产品说明

Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测通过蛋白印迹法和/或免疫荧光法发现为小胶质细胞增殖标记物的蛋白。

特异性/敏感性

Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit 中的每种抗体都能检测其靶蛋白的内源水平。HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 无法检测人 HS1 蛋白。经计算，HS1 大小为 54 kDa，但是在 SDS-PAGE 凝胶上的表观分子量为 80 kDa。Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb 可检测仅在 Thr288、Thr232 或 Thr198 被磷酸化的 Aurora A/B/C 的内源水平。HP1α/β (C7F11) Rabbit mAb 不会与 HP1 γ 蛋白发生交叉反应。

来源/纯化

使用与小鼠 HS1 中 Leu310、人 Survivin 中 Cys60、人 Aurora B 中 Thr232、人 HP1α 中羧基末端、人 Ki-67 和 MCM2 中氨基末端周围的残基相对应的合成肽以及重组小鼠 ASC/TMSI 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

使用大量神经系统疾病和衰老模型的 RNA-seq 数据发现了不同的小胶质细胞激活状态。这些激活状态被分为与增殖、神经退化、干扰素关系和 LPS 关系等相对应的模型 (1)。以往使用 RNA-seq 发现特定脑细胞类型的标记物的研究表明，HS1 和 ASC/TMS1 有用且是研究小胶质细胞的专门工具 (2)。HS1 是一种仅在造血源性组织和细胞中表达的蛋白激酶底物 (3)，并且 ASC/TMS1 被发现是一种关键的炎症信号转导组分，并在出现促炎信号后结合并激活 caspase-1 (4)。
Ki-67 是一种胞核非组蛋白蛋白 (5)，它在增殖细胞中普遍表达，但在休眠细胞中缺失 (6)。微小染色体维持蛋白 2 (MCM2) 是一种在 DNA 复制和细胞分裂中起到作用的胞核蛋白 (7)，并且常用作脑组织等细胞增殖的一种标记物 (8)。生存素可结合并抑制 caspase-3，从而通过抑制细胞凋亡并促进细胞分裂来调控细胞周期 G2/M-期的检查点 (9)。Aurora A、B 和 C 是一个高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶家族，可调控有丝分裂和减数分裂期间的染色体排列和分离。他们的活性需要在激酶结构域内发生苏氨酸自磷酸化，Aurora A 为 Thr288 位点、Aurora B 为 Thr232，Aurora C 为 Thr198 (10)。异染色质蛋白 1 (HP1) α 和 β 为异染色质接头蛋白分子，与基因沉默和高阶染色质结构有关 (11)。
  1. Friedman, B.A. et al. (2018) Cell Rep 22, 832-47.
  2. Zhang, Y. et al. (2014) J Neurosci 34, 11929-47.
  3. Kitamura, D. et al. (1995) Biochem Biophys Res Commun 208, 1137-46.
  4. Srinivasula, S.M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 21119-22.
  5. Gerdes, J. et al. (1983) Int J Cancer 31, 13-20.
  6. Weigel, M.T. and Dowsett, M. (2010) Endocr Relat Cancer 17, R245-62.
  7. Mincheva, A. et al. (1994) Cytogenet Cell Genet 65, 276-7.
  8. Doorn, K.J. et al. (2014) Neural Plast 2014, 959154.
  9. Li, F. et al. (1999) Nat Cell Biol 1, 461-6.
  10. Goldenson, B. and Crispino, J.D. (2015) Oncogene 34, 537-45.
  11. Maison, C. and Almouzni, G. (2004) Nat Rev Mol Cell Biol 5, 296-304.

通路和蛋白

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