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19171
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit
一抗
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Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit #19171

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使用 Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb（上）和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下）对来自不同细胞系和组织的提取物进行蛋白质印迹分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对来自 Baf3、32D 和小鼠脾的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（上）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下），对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体（特定小鼠）（上图）或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对 J774A.1 和 Raw 264.7 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
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一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。KARPAS细胞系来源：剑桥大学的 Abraham Karpas 博士。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb（上图）和总 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb #72604（下图），对未经处理 (-) 或已经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml; +) 处理的血清饥饿 U266 和 A-431 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb（上）和 Akt1 (pan) (C67E7) 兔 mAb #4691（下）对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白进行蛋白质印迹分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠脾进行免疫组织化学分析。
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对经 Calyculin A #9902（100nM，30 分钟）处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb，泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 11
对 J774A.1 细胞提取物 ASC/TMS1 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 ASC (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)。使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体（特定小鼠）进行蛋白印迹分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 12
对 KARPAS-299 细胞提取物中的 Stat2 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb。使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。KARPAS细胞系来源：剑桥大学的 Abraham Karpas 博士。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb（绿色）和 β-actin (8H10D10) Mouse mAb #3700（红色），对血清饥饿（左图）或经 IFNα 处理（1000 U/ml，30 分钟；右图）的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb（绿色）对 A172 细胞（阳性，左）或 LNCaP 细胞（阴性，右）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的 LL2 同基因的肿瘤进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（左）或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559（右），对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意：PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的 J774A.1 细胞沉淀物（左图，阳性）或 RAW 264.7 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 18
使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb（绿色），对血清饥饿（左图）或经 IFNα 处理（#1000，30 ng/mL，分钟；右图）的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 19
使用 Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb 对未经处理（蓝色）或已经 IFN-α（绿色）处理的 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 fragment (Alexa Fluor 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 20
对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。首先用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)（绿色）和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450（黄色）标记切片。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后，切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657（红色）孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082（蓝色）标记。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 21
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060，对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112（左）和 TBST/5% Normal Goat Serum（右）对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 22
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠前胃进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 23
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 （红色）作为对照组，使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb（蓝色）对 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor 647 Conjugate) 用作二抗。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 24
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)（绿色）对 32D 细胞（左图）和 C2C12 细胞（右图）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 25
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 26
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠大脑进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 27
使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对经人源干扰素-α (IFN-α) #9906 (10nM) 处理 30 分钟的 U266 细胞的交联染色质和 Stat2 (D9J7L) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 Stat2 的已知靶基因 USP18 内结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。如需了解其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 28
使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对 NIH/3T3 细胞（红色）和 32D 细胞（蓝色）进行流式细胞分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 29
在 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（未经处理（左图）或经过 LY294002 处理（右图）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）上使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 30
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）作为对照，使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)（左图）对石蜡包埋的小鼠结肠进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 31
使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对经人源干扰素-α (IFN-α) #9906 (10nM) 处理 30 分钟的 U266 细胞的交联染色质和 Stat2 (D9J7L) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在染色体 22（上图）内的结合，包括 Stat2 的已知靶标基因 USP18（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 32
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 33
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠胸腺进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 34
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经 Human Interferon-α (IFN-α) #9906 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 U266 细胞中提取的交联染色质，在加入Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human USP18 promoter primers、SimpleChIP® Human WARS Intron 1 Primers #30101 以及 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量，用染色质投入总量（相当于 1）相对应的信号进行表示。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 35
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。（组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠）
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 36
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 37
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 38
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对石蜡包埋的 Renca 同系肿瘤（左上图）、4T1 同系乳腺肿瘤（右上图）、Renca 细胞沉淀物（左下图）和 4T1 细胞沉淀物（右下图）进行免疫组织化学分析。两种肿瘤均显示浸润的免疫细胞染色。请注意，Renca 肿瘤细胞中存在染色，而 4T1 肿瘤细胞中没有染色，这与相应细胞沉淀的染色结果一致。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 39
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（绿色），对经 LY294002 处理（左）或经胰岛素处理（右）的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 40
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（绿色）或已经过 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM，1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 41
对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。切片先用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) #67824（绿色）和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450（黄色）标记。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后，切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657（红色）孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082（蓝色）标记。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 42
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠)（绿色）对未经（左上图）或已经 LPS（50 ng/ml，4 小时，中间）处理或已经 LPS 处理后再用 ATP（5 mM，45 分钟，右上图）处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 与 J774A.1（左下图）或 Raw 264.7（右下图）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。注意，经过LPS 和 ATP（白色箭头）刺激后，ASC 会转位至炎症小体。
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit: Image 43
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP®Isotype Control #3900（虚线）对 Raw264.7 细胞（蓝色）和 J774A.1 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor®488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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19171T		 1 个试剂盒（6 x 20 微升）

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产品说明

Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测通过蛋白印迹法和/或免疫荧光法检测发现为干扰素相关小胶质细胞活性标记物的蛋白。

特异性/敏感性

Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit 中的每种抗体都能检测其靶蛋白的内源水平。Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb 可检测仅在 Tyr690 被磷酸化的 Stat2 蛋白的内源水平。Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb 检测仅在 Ser473 磷酸化后的内源水平的 Akt。HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 无法检测人 HS1 蛋白。经计算，HS1 大小为 54 kDa，但是在 SDS-PAGE 凝胶上的表观分子量为 80 kDa。

来源/纯化

使用与小鼠 HS1 中 Leu310、人 Akt3 中 His140、人 Stat2 中 Leu706 周围的残基相对应的合成肽、与人 Stat2 蛋白中 Tyr690 和人 Akt 中 Ser473 周围的残基相对应的磷酸化特异性合成肽以及重组小鼠 ASC/TMS1 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

使用大量神经系统疾病和衰老模型的 RNA-seq 数据发现了不同的小胶质细胞激活状态。这些激活状态被分为与增殖、神经退化、干扰素关系和 LPS 关系等相对应的模型 (1)。以往使用 RNA-seq 发现特定脑细胞类型的标记物的研究表明，HS1 和 ASC/TMS1 有用且是研究小胶质细胞的专门工具 (2)。HS1 是一种仅在造血源性组织和细胞中表达的蛋白激酶底物 (3)，并且 ASC/TMS1 被发现是一种关键的炎症信号转导组分，并在出现促炎信号后结合并激活 caspase-1 (4)。
Stat2 对于 I 型干扰素 IFN-α/β 诱导的转录反应至关重要 (5,6)。在 IFN-α/β 的刺激下，通过结合受体结合的 Jak 激酶，从而磷酸化 Tyr690 位点，进而激活 Stat2 (7)。Akt 是一种在调控存活和凋亡方面起到关键作用的蛋白激酶。各种生长和存活因子均会激活 Akt，以让其在包括 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中起作用 (8-10)，并且其活性经证明对关键 IFN 诱导蛋白的上调必不可少 (11)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (12) ，以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ，它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (13,14)。
  1. Friedman, B.A. et al. (2018) Cell Rep 22, 832-47.
  2. Zhang, Y. et al. (2014) J Neurosci 34, 11929-47.
  3. Kitamura, D. et al. (1995) Biochem Biophys Res Commun 208, 1137-46.
  4. Srinivasula, S.M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 21119-22.
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  6. Ihle, J.N. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 211-7.
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  10. Franke, T.F. et al. (1995) Cell 81, 727-36.
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  12. Alessi, D.R. et al. (1996) EMBO J 15, 6541-51.
  13. Sarbassov, D.D. et al. (2005) Science 307, 1098-101.
  14. Jacinto, E. et al. (2006) Cell 127, 125-37.

通路和蛋白

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