试剂盒使用信息
实验步骤
2679: 蛋白印迹实验 , 免疫组织化学(石蜡) , 免疫荧光法*
7074: 蛋白印迹实验
10405: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
12238: 蛋白印迹实验 , 免疫荧光法* , 流式细胞术
12851: 蛋白印迹实验 , 免疫组织化学(石蜡) , 免疫荧光法* , 流式细胞术
13635: 蛋白印迹实验
25657: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
43124: 蛋白印迹实验
49671: 蛋白印迹实验 , 免疫沉淀法(琼脂糖)
79769: 蛋白印迹实验 , 免疫组织化学(石蜡)
产品说明
MHC I 类抗原处理和呈递抗体小包装组合提供了一种经济的手段,用于检查与 MHC I 级受限抗原处理和呈递相关的关键蛋白。提供的抗体可检测总蛋白水平。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。
特异性/灵敏度
MHC I 类抗原处理和呈递抗体小包装组合中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb 可识别总钙网蛋白的内源水平。泛素 (E4I2J) 兔单克隆抗体可检测游离泛素和聚泛素化蛋白的内源水平。该抗体能检测游离泛素、线性聚泛素(M1 连接的)和含有 K6、K11、K27、K29、K33、K48 和 K63 连接的同型聚泛素链。HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb 可识别 HLA-G 总蛋白的内源水平。Calnexin (C5C9) Rabbit mAb 可检测总钙联蛋白的内源水平。TAP2 (E8G5I) Rabbit mAb 可识别 TAP2 总蛋白的内源水平。该抗体不会与 TAP1 蛋白发生交叉反应。PSMB8/LMP7 (D1K7X) Rabbit mAb 可识别内源水平的 PSMB8/LMP7 总蛋白。该抗体可识别 PSMB8/LMP7 的 28 kDa 前体和 23 kDa 成熟形式,但不会与 PSMB5 蛋白发生交叉反应。该抗体可识别 80-100 kDa 的未知来源蛋白。TAP1 (E4T4F) Rabbit mAb 可识别 TAP1 总蛋白的内源水平。该抗体不会与 TAP2 蛋白发生交叉反应。β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb 可识别 β2-microglobulin 总蛋白的内源水平。IFNGR1 (E444) Antibody 可检测 IFNGR1 内源水平的总蛋白。
来源/纯化
使用对人 TAP1 蛋白的羧基末端具有特异性的重组蛋白或与人钙网蛋白的氨基末端、人 PSMB8/LMP7 蛋白的羧基末端、人泛素蛋白的 Gly35、人 HLA-G 蛋白的 Leu102、人 β2-微球蛋白的 Val57、人 TAP2 蛋白的 Val485 或人钙连接蛋白的 Pro52 附近残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 IFNGR1 蛋白中 Glu444 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。多克隆抗体通过蛋白 A 和肽亲和力色谱进行纯化。
背景
在大多数有核细胞类型的表面表达的 I 类 MHC /β2-微球蛋白二聚体的主要功能是通过将蛋白水解肽段从胞浆蛋白呈递给细胞毒性 CD8+T 细胞来调节适应性免疫应答。为了使 MHC I 类分子呈递自身和非自身肽,肽片段必须首先衍生自通过泛素-蛋白酶体系统降解的多泛素化蛋白。在炎性过程中,蛋白酶体的酶核心可以通过 IFNγ 信号转导形成,以包含亚基(例如 PSMB8/LMP7),这些亚基可增强抗原呈递细胞对抗原肽的呈递作用(1)。然后将通过泛素依赖性蛋白酶体降解而产生的细胞溶质肽片段通过肽转运蛋白 TAP1 和 TAP2 转运到 ER 内腔中,其中多种伴侣蛋白(如钙粘蛋白和钙网蛋白)的活性有助于将其装载到 I 类 MHC/β2 -微球蛋白二聚体,以便转运至高尔基体,最终转运至细胞表面(2-6)。在实体和液体肿瘤中都观察到了 I 类抗原呈递机制的多种成分表达的缺陷,这是一种逃避肿瘤免疫的机制(7)。
Ferrington, D.A. and Gregerson, D.S. (2012) Prog Mol Biol Transl Sci 109, 75-112.
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Seliger, B. (2008) Cancer Immunol Immunother 57, 1719-26.
通路与蛋白质
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蛋白质:P0CG47
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数据库链接
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