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36064
MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit #36064

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MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 1

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 2

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb(实线)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用泛素 (E4I2J) 兔单克隆抗体(上图)和 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未经 (-) 或已经 MG-132 #2194(10μM,90 分钟;+)处理的 HeLa、NIH/3T3 和 H-4-II-E 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 JEG-3 细胞沉淀物(左图,阳性)或 LNCaP 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用 Calnexin (C5C9) Rabbit mAb(绿色)对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝已用 DY-554 phalloidin(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Normal Rabbit IgG #2729 (泳道 2) 或 TAP2 Antibody (泳道 3),对 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8901 (10 ng/ml, 16 小时) 处理的 HeLa 细胞提取物进行 TAP2 的免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 TAP2 Antibody 进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 PSMB8/LMP7 (D1K7X) Rabbit mAb(上图)和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。(T2 细胞系包括一个纯合性缺失的 PSMB8/LMP7 (13))。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 TAP1 Antibody(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理 (-) 或经 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8901 处理(10 ng/ml,16 小时;+)的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb,对 DLD-1 细胞(蓝色)和 HeLa 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 作为二抗。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 10

对 NCI-H226 细胞提取物 IFNGR1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10 % input,泳道 2 为 Normal Rabbit IgG #2729,泳道 3 为 IFNGR1 (E444) Antibody。使用 IFNGR1 (E444) Antibody 进行蛋白印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 检测。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb(绿色)和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor®555 Conjugate) #8046(红色)对 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用泛素 (E4I2J) 兔单克隆抗体 对各种重组连接特异性聚泛素链、重组游离单泛素(单泛素)和重组线性聚泛素(线性泛素)(各 300 ng)进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 13

以浓度匹配的Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)作为对照,使用 HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb(左图)对石蜡包埋的人胎盘进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 14

在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 Calnexin (C5C9) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 TAP2 Antibody(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理 (-) 或经 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8901 处理(10 ng/ml,16 小时;+)的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 PSMB8/LMP7 (D1K7X) Rabbit mAb(上图)和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对未经处理 (-) 或已经 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8901(100 ng/ml,72 小时;+)处理的 HeLa 和 SW620 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb(绿色),对 PANC-1 细胞(阳性,左)和 DLD-1 细胞(阴性,右)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 IFNGR1 (E444) Antibody(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb 对 SH-SY5Y 和 KNRK 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺腺癌细胞进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Calnexin (C5C9) Rabbit mAb 对 PANC1、HepG2 和 A204 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 PSMB8/LMP7 (D1K7X) Rabbit mAb(上图)和 DYKDDDDK Tag Antibody #2368(下图),对转染空载 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人 PSMB5 (hPSMB5-Myc/DDK; +) 或带有 Myc/DDK 标签的全长人 PSMB8 (hPSMB8-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb,对石蜡包埋的 HeLa(左)或 DLD-1(右)细胞颗粒进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 24

使用 IFNGR1 (E444) Antibody(上图)、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(中间)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对转染空载 (-) 或转染带 Myc/DDK 标签的人全长 IFNGR1 蛋白 (hIFNGR1-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 25

使用 HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对 JEG-3 和 LNCaP 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 26

在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb,对石蜡包埋的结肠癌进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 27

使用 HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb(上图)、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(中图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带有 MycDDK 标签的人全长 HLA-G 蛋白 (hHLA-G-MycDDK; +) 的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人体皮肤进行免疫组织化学分析。

MHC Class I Antigen Processing and Presentation Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (DA8) Rabbit mAb #8457(下),对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。由于 β2-microglobulin 基因座上的基因缺失,DLD-1 和 Daudi 细胞系对 β2-microglobulin 呈阴性。

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产品说明

MHC I 类抗原处理和呈递抗体小包装组合提供了一种经济的手段,用于检查与 MHC I 级受限抗原处理和呈递相关的关键蛋白。提供的抗体可检测总蛋白水平。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

MHC I 类抗原处理和呈递抗体小包装组合中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb 可检测总钙网蛋白的内源水平。泛素 (E4I2J) 兔单克隆抗体可检测游离泛素和聚泛素化蛋白的内源水平。该抗体能检测游离泛素、线性聚泛素(M1 连接的)和含有 K6、K11、K27、K29、K33、K48 和 K63 连接的同型聚泛素链。HLA-G (E8N9C) XP® Rabbit mAb 可识别 HLA-G 总蛋白的内源水平。Calnexin (C5C9) Rabbit mAb 可检测总钙联蛋白的内源水平。TAP2 Antibody 可识别内源水平的 TAP2 总蛋白。PSMB8/LMP7 (D1K7X) Rabbit mAb 可识别内源水平的 PSMB8/LMP7 总蛋白。该抗体可识别 PSMB8/LMP7 的 28 kDa 前体和 23 kDa 成熟形式,但不会与 PSMB5 蛋白发生交叉反应。该抗体可识别 80-100 kDa 的未知来源蛋白。TAP1 Antibody 可识别内源水平的 TAP1 总蛋白。该抗体与未知来源的 100kDa 蛋白发生交叉反应。β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb 可识别 β2-microglobulin 总蛋白的内源水平。IFNGR1 (E444) Antibody 可检测 IFNGR1 内源水平的总蛋白。

来源/纯化

通过用合成肽对免疫动物进行接种来产生单克隆抗体,该肽对应于人钙网蛋白蛋白的氨基末端、人 PSMB8/LMP7 蛋白的羧基末端、人泛素蛋白的 Gly35、人 HLA-G 蛋白的 Leu102、人 β2-microglobulin 蛋白的 Val57 和人钙调蛋白的 Pro52。使用与小鼠 TAP1 蛋白中的 Val612、人 TAP2 蛋白中的 Phe588、人 IFNGR1 蛋白中 Glu444 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

背景

在大多数有核细胞类型的表面表达的 I 类 MHC /β2-微球蛋白二聚体的主要功能是通过将蛋白水解肽段从胞浆蛋白呈递给细胞毒性 CD8+T 细胞来调节适应性免疫应答。为了使 MHC I 类分子呈递自身和非自身肽,肽片段必须首先衍生自通过泛素-蛋白酶体系统降解的多泛素化蛋白。在炎性过程中,蛋白酶体的酶核心可以通过 IFNγ 信号转导形成,以包含亚基(例如 PSMB8/LMP7),这些亚基可增强抗原呈递细胞对抗原肽的呈递作用(1)。然后将通过泛素依赖性蛋白酶体降解而产生的细胞溶质肽片段通过肽转运蛋白 TAP1 和 TAP2 转运到 ER 内腔中,其中多种伴侣蛋白(如钙粘蛋白和钙网蛋白)的活性有助于将其装载到 I 类 MHC/β2 -微球蛋白二聚体,以便转运至高尔基体,最终转运至细胞表面(2-6)。在实体和液体肿瘤中都观察到了 I 类抗原呈递机制的多种成分表达的缺陷,这是一种逃避肿瘤免疫的机制(7)。

  1. Ferrington, D.A. and Gregerson, D.S. (2012) Prog Mol Biol Transl Sci 109, 75-112.
  2. Antoniou, A.N. et al. (2003) Curr Opin Immunol 15, 75-81.
  3. Jensen, P.E. (2007) Nat Immunol 8, 1041-8.
  4. Kloetzel, P.M. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2, 179-87.
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  7. Seliger, B. (2008) Cancer Immunol Immunother 57, 1719-26.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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