试剂盒使用信息
实验步骤
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2710: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫荧光法, 流式细胞术
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7074: 蛋白印迹实验
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13198: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法, 流式细胞术
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70551: 蛋白印迹实验
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77576: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠)
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91068: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫荧光法
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97415: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠), 免疫荧光法
产品说明
Human TREM2 Activity Antibody Sampler Kit 提供了一种使用磷酸化特异性和对照抗体来评估人 TREM2 信号转导通路主要成员的经济合算的方式。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。
特异性/灵敏度
Human TREM2 Activity Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。TREM2 (D8I4C) Rabbit mAb 可识别 TREM2 总蛋白的内源水平。TREM2 (E9U8L) Rabbit mAb (Amino-terminal Antigen) 可检测内源水平的 TREM2 总蛋白。该蛋白不会与小鼠 TREM2 发生交叉反应。观察到一条非特异性未知条带在迁移时的分子量大约为 75 kDa。CD33 Antibody 可检测 CD33 总蛋白的内源水平。Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 可识别 Syk 总蛋白的内源水平。Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb 仅在 Syk 蛋白在人 Syk 的 Tyr525/526 位点或小鼠 Syk 的 Tyr519/520 位点被磷酸化时方可检测内源水平的Syk 蛋白。它还可检测在人 Syk 的 Tyr526 位点或小鼠 Syk 的 Tyr520 位点被单磷酸化的 Syk 蛋白。它不会与其他酪氨酸磷酸化的蛋白酪氨酸激酶发生交叉反应。DAP12 (E7U7T) Rabbit mAb 可识别 DAP12 总蛋白的内源水平。
来源/纯化
使用与人 TREM2 中 Leu221、人 DAP12 蛋白中 Pro110、人 Syk 蛋白中 Asn463 周围的残基相对应的合成肽,与人 Syk 蛋白中 Tyr525/526 周围的残基相对应的合成磷酸肽,以及与人 TREM2 蛋白的氨基末端具有特异性的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 CD33 蛋白中羧基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过肽亲和色谱纯化抗体。
背景
阿尔茨海默病 (AD) 是全球最常见的一种神经退行性疾病。临床上,表现为存在细胞外淀粉样斑块和细胞内神经原纤维缠结,可导致神经元功能障碍和细胞死亡。髓细胞上表达的触发受体 2 (TREM2) 是一种位于先天免疫细胞膜上的蛋白质(包括大脑中的小胶质细胞),在遗传上与 AD 相关,特定的变异使疾病风险增加了三倍 (1,2)。TREM2 受体是一种单通道 I 型膜糖蛋白,包括一个细胞外免疫球蛋白样结构域、一个跨膜结构域和一个细胞浆尾部。激活后,TREM2 与酪氨酸激酶结合蛋白 DNAX 激活蛋白 12 (DAP12, TYROBP) 相互作用,形成一种受体信号转导复合体。DAP12 蛋白结构包括一个较短的胞外域、一个跨膜结构域和一个细胞浆免疫受体酪氨酸激活基序 (ITAM) (2-9)。ITAM 用作酪氨酸激酶的结合位点,包括脾酪氨酸激酶 (Syk)。Syk 由两个串联的氨基末端 Src 同源 (SH) 2 结构域组成,由 SH2 激酶接头分隔,C 末端酪氨酸激酶结构域由域间接头与 SH2 结构域分隔。当 Syk 与 ITAM 结合时,它会改变构象,从而使域间接头区域内的残基(包括 Tyr352)被磷酸化。激活环内的残基随后被磷酸化,从而导致 Syk 完全激活。Tyr525 和 Tyr526 位于 Syk 激酶结构域的活化环,并且这些残基(相当于小鼠 Syk 的 Tyr519/520)的磷酸化对 Syk 功能非常重要 (10-12)。这种激活可以导致多种细胞反应的介导,包括增殖、分化、炎症和吞噬作用。有证据表明,TREM2 和 DAP12 可能以 Syk 依赖性方式起作用,以促使 AD 中的小胶质细胞反应 (2,4-8,13)。
还有证据表明,这些过程可能通过 TREM2 和细胞表面受体 CD33 之间的串扰来调节,CD33 是一种唾液酸结合 Ig 样凝集素 (Siglec-3) I 型跨膜蛋白。与
TREM2 非常相似,
CD33 已被确定为 AD 的风险基因。CD33 优先结合 α-2、6-连接的唾液酸,这种唾液酸可在大脑中的唾液酸化神经节苷脂中发现。CD33 的激活已被证明可抑制多种细胞过程。有证据表明,TREM2 可能在 CD33 下游发挥作用,并且 AD 中 TREM2 依赖性小胶质细胞信号转导可能直接被 CD33 激活抑制(14-17)。
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通路与蛋白质
探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。
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