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99891
Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit
一抗
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Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit #99891

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Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 1

使用 ATM (D2E2) Rabbit mAb 对 HeLa 、NCCIT 和 PYS2 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 2

使用 Phospho-ATM (Ser1981) (D25E5) Rabbit mAb 及 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087，对未经处理 (左图) 或已经喜树碱处理 (1 μM，2小时；右图) 的 Hela 细胞进行流式细胞分析，以测量 DNA 含量。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 3

使用 Rad51 (D4B10) Rabbit mAb（泳道 2）对 HeLa 细胞提取物 Rad51 进行免疫沉淀。使用相同的抗体进行蛋白质印迹检测。泳道 1 是 10% 输入对照。

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使用 BRCA1 (A8X9F) Rabbit mAb 对 HT-29、HeLa 和 MCF7 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 BRCA2 (D9S6V) Rabbit mAb（上）或 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 6

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Rad54 (D4W3Z) Rabbit mAb（泳道 3），对 293T 细胞提取物 Rad54 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Rad54 (D4W3Z) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

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使用 p95/NBS1 (D6J5I) Rabbit mAb（绿色 ）对 SK-MEL-28 细胞（左）和 GM07166 细胞（右）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 554 Phalloidin #13054 标记。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 8

使用 Phospho-p95/NBS1 (Ser343) Antibody 对经 UV 或经羟基脲 (HU) 处理所示时间的 Mv1Lu 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 CtIP (D76F7) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 11

使用 Phospho-ATM (Ser1981) (D25E5) Rabbit mAb (上图) 和 ATM (D2E2) Rabbit mAb #2873(下图)，对未经处理 (-) 或已经新制癌菌素 (NCS 10 μM，1 小时; +) 处理的 HCT 116细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 12

使用 Rad51 (D4B10) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 13

使用 BRCA2 (D9S6V) 兔单克隆抗体 (上图) 或 α-辅肌动蛋白 (D6F6) XP® 兔单克隆抗体（下图），对野生型 (WT) 或 BRCA2 敲除型 (-/-) DLD-1细胞进行蛋白质印迹分析。DLD1 (WT) 和 DLD1 (-/-) 细胞由耶鲁大学(New Haven, CT) 的 Judit Jimenez 博士惠赠。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 14

使用 Rad54 (D4W3Z) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP ® Isotype Control #3900（泳道 2）或 p95/NBS1 (D6J5I) Rabbit mAb（泳道 3），对 HeLa 细胞提取物 p95/NBS1进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 p95/NBS1 (D6J5I) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 16

使用 p95/NBS1 (D6J5I) Rabbit mAb（上）和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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99891T		 1 个试剂盒(9 x 20 µl)

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产品说明

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit 提供一种经济实惠的方法来检测参与 HR DNA 修复的蛋白。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

Homologous Recombination (HR) DNA Repair Antibody Sampler Kit 中的每种抗体都能检测其靶蛋白的内源水平。Phospho-ATM (Ser1981) (D25E5) Rabbit mAb 可检测仅在 Ser1981 被磷酸化的 ATM 蛋白的内源水平。Phospho-p95/NBS1 (Ser343) Antibody 可检测仅在 Ser343 被磷酸化的 p95/NBS1 蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用重组人 ATM、Rad51、BRCA1 和 BRCA2 或与人 Rad54 中 Gly246、人 p95/NBS1 中 Ala740 周围的残基或人 CtIP 蛋白中羧基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 ATM 中 Ser1981 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生磷酸化特异性单克隆抗体。使用与人 p95/NBS1 蛋白中的 Ser343 相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生磷酸化特异性多克隆抗体。多克隆抗体经肽亲和层析进行纯化。

背景

DNA 双链断裂 (DSBs) 是潜在的危险损伤，可由电离辐射 (IR)、拟辐射化合物或 DNA 复制抑制剂诱发。细胞通过两种不同但部分重叠的信号转导通路（非同源末端连接 [NHEJ] 和同源重组 [HR]）来识别并修复双链断裂 (DSB)。使用复制的姊妹染色单体作为修复模板，通过 HR 可以修复 S 或 G2 期出现的 DSB (1)。在暴露 DNA DSB 的情况下，Ser1981 自磷酸化会导致 ATM 激活。ATM 可调控对 DNA 损伤的各种反应，包括调控 HR 因子 (2)。Rad51 重组酶会沿着单链 DNA 聚合并形成纤丝，且在 Rad54 和 BRCA2 等辅助蛋白的帮助下能够介导 HR (3)。BRCA2 已被证实是 Rad51 定位到 DSB 部位所必需的，而且缺乏 BRCA1 和 BRCA2 的细胞无法通过 HR 修复 DSB (4)。NBS1 对 HR 至关重要，并且需要与 CtIP 的 CDK 依赖性结合以及随后 ATM 对 Ser278 和 Ser343 的磷酸化 (5-6)。

  1. Hartlerode, A.J. and Scully, R. (2009) Biochem J 423, 157-68.
  2. Lee, J.H. and Paull, T.T. (2007) Oncogene 26, 7741-8.
  3. Sung, P. et al. (2003) J Biol Chem 278, 42729-32.
  4. Tutt, A. and Ashworth, A. (2002) Trends Mol Med 8, 571-6.
  5. Wang, H. et al. (2013) PLoS Genet 9, e1003277.
  6. Wen, J. et al. (2013) Oncogene 32, 4448-56.

通路和蛋白

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