查看特别推荐 >>
2225
Caspase-1 Antibody
一抗
多克隆抗体
  1. 产品
  2. 一抗
  3. Caspase-1 Antibody

Caspase-1 Antibody #2225

引用 (162)
筛选器：
  1. WB
Western Blotting Image 1: Caspase-1 Antibody
使用 Caspase-1 Antibody，对来自 THP-1 细胞和 HL-60 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
图像库
了解关于我们如何获得图像方面的更多信息
To Purchase # 2225S
目录# 规格 价格 库存
2225T		 20 µl
2225S		 100 µl

定制制剂

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa) 20p20.30 至 45 β、δ、γ、50α。
来源 兔

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
蛋白质印迹法 1:1000

保存

保存在 10mM sodium HEPES（pH 为 7.5）、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。-20℃ 保存。切勿分装抗体。

实验步骤

打印

查看 > 收起 >

蛋白质印迹法实验步骤

蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育，同时轻轻晃动。

注意：请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS)：(#9808) 若要制备 1 L 1X PBS：将 50 ml 20X PBS 添加至 950 ml dH2O，混合。
  2. 10 X Tris 缓冲盐水 (TBS)：(#12498) 若要配制 1 L 1X TBS：将 100 ml 10X 添加至 900 ml dH2O ，混合。
  3. 1X SDS 样品缓冲液：Blue Loading Pack (#7722) 或 Red Loading Pack (#7723) 通过将 1/10 体积的 30X DTT 添加至 1 体积的 3X SDS 样品缓冲液，配制新鲜的 3X 还原性上样缓冲液。用 dH2O 稀释至 1X。
  4. 10X Tris-Glycine SDS 电泳缓冲液：(#4050) 若要配制 1 L 1X 电泳缓冲液： 将100 ml 10X 电泳缓冲液添加至 900 ml dH2O ，混合。
  5. 10X Tris-Glycine 转移缓冲液：(#12539) 要制备 1 L 1X 转移缓冲液：将 100 ml 10X 转移缓冲液添加至 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中，并混合。
  6. 含有 Tween® 20 (TBST) 的 10 X Tris 盐缓冲液：(#9997) 要制备 1 L 1X TBST： 将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O 中并混合。
  7. 脱脂奶粉：(#9999)。
  8. 封闭缓冲液：含 5% w/v 脱脂奶粉的 1X TBST；要制备 150 ml，将 7.5 g 脱脂奶粉添加至 150 ml 1X TBST 中并充分混匀。
  9. 洗涤缓冲液：(#9997) 1X TBST。
  10. 一抗稀释缓冲液：含 5% 脱脂奶粉的 1X TBST；要制备 20 ml，将 1.0 g 脱脂奶粉添加至 20 ml 1X TBST 中并充分混匀。
  11. Biotinylated Protein Ladder Detection Pack：(#7727)。
  12. Blue Prestained Protein Marker, Broad Range (11-250 kDa)： (#59329)。
  13. 印迹膜：(#12369) 本实验步骤针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常推荐 0.2 µm 孔径。
  14. HRP 偶联二抗：Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody (#7074)。
  15. 检测试剂：SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。

B. 蛋白质印迹

制备样品的常规流程。

  1. 添加含有调节因子的新鲜培养基，使其对细胞进行处理一段时间。
  2. 从培养物中吸出培养基；用 1X PBS 洗涤细胞；吸出。
  3. 加入 1X SDS 样品缓冲液（6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径的平板 500 µl）来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移至微量离心管。置于冰上。
  4. 超声处理 10–15 秒以完成细胞裂解并剪切 DNA（以降低样品粘度）。
  5. 取 20 µl 样品，在 95–100°C 下加热 5 分钟；放在冰上冷却。
  6. 微量离心机内离心 5 分钟。

  7. 上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。

    注意：建议将预染蛋白分子量标准品（#59329，10 µl/泳道）上样，以验证转膜的效率，生物素化蛋白质标准品（#7727，10 µl/泳道）可以直接在膜上显出条带以确定分子量。

  8. 电转至硝酸纤维素膜 (#12369)。

C. 膜封闭和抗体孵育

注意：体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜；对于不同尺寸的膜，可相应调整体积。

I. 膜封闭

  1. （可选）转移之后，在室温下用 25 ml TBS 将硝酸纤维素膜洗涤 5 分钟。
  2. 将膜置于 25 ml 封闭缓冲液中，在室温下孵育 1 小时。
  3. 用 15ml TBST 洗涤三次，每次 5 分钟。

II. 一抗孵育

  1. 将膜和一抗（按照产品网页中建议的适当稀释度和稀释液）置于 10 ml 一抗稀释缓冲液中在 4°C 下孵育过夜并不时轻轻晃动。
  2. 用 15ml TBST 洗涤三次，每次 5 分钟。
  3. 将膜与 Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody （#7074，按 1:2000 的比例）和 Anti-biotin, HRP-linked Antibody （#7075，按 1:1000–1:3000 的比例）一起孵育，并且轻轻晃动且在室温下孵育 1 小时后，再检测 10 ml 封闭缓冲液中的生物素化蛋白标记物。
  4. 用 15ml TBST 洗涤三次，每次 5 分钟。
  5. 继续进行检测（D 部分）。

D. 蛋白质检测

使用说明：

  1. 在 TBST 中清洗与膜结合的 HRP (Antibody Conjugate) 三次，持续 5 分钟。
  2. 通过稀释一部分 2X 试剂 A 和一部分 2X 试剂 B（例如：要制备 10 ml，则添加 5 ml 试剂 A 和 5 ml 试剂 B），来制备 1X SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。混匀。
  3. 将底物与膜一起孵育 1 分钟，倒掉多余溶液（膜将保持湿润），然后包裹在塑料中并在 X 线胶片下曝光。

* 避免反复接触皮肤。

发布​时间 2005 年 6 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号：263

特异性/灵敏度

Caspase-1 Antibody 可检测Caspase-1 原的内源水平和Caspase-1 p20 亚基的内源水平。预期该抗体可检测 α、β、γ 和 δ 同工型。

物种反应性：

人

来源/纯化

通过采用与人Caspase-1 的 p20 亚基内部的残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白质 A 和肽亲和色谱纯化抗体。

背景

Caspase-1 或白介素-1ß 转化酶 (ICE/ICEα) 是一种 I 类半胱氨酸蛋白酶，还包括 caspase-4、-5、-11 和 -12。Caspase-1 能够将炎症细胞因子（如 pro-IL-1ß 和干扰素-γ 诱导因子 (IL-18)）裂解成成熟蛋白 (1,2)。与其他半胱天冬酶一样，caspase-1 通过酶原蛋白水解被激活，产生一个由两个活性亚基 （p20 和 p10）组成的四聚体。Caspase-1 具有巨大的氨基末端前体域，此区域包含一个半胱天冬酶募集区域 (CARD)。Caspase-1 过表达会诱导细胞凋亡 (3)。Caspase-1 缺失小鼠在凋亡方面没有严重缺陷，但在 pro-IL-1β 蛋白的成熟过程中有缺陷，而且这类小鼠可抵抗内毒素休克 (4,5)。研究发现，caspase-1 至少有六种同工型，其中包括 caspase-1 α、β、γ、δ、ε 和 ζ (6)。多数 caspase-1 同工型（α、β、γ 和 δ）生成的产物在 30-48 kDa 之间，并通过过表达诱导细胞凋亡。Caspase-1 ε 通常只包含 p10 亚基，不会诱导细胞凋亡，可作为一种显性失活蛋白。Caspase-1 中广泛表达的 ζ 同工型会诱导细胞凋亡，并且与 α 同工型相比，缺乏 39 个氨基末端残基 (6)。caspase-1 通过一个称为“炎症小体”的寡聚化分子平台激活，此中包含 caspase-5、Pycard/Asc 和 NALP1 (7)。
  1. Thornberry, N.A. et al. (1992) Nature 356, 768-74.
  2. Martinon, F. and Tschopp, J. (2004) Cell 117, 561-74.
  3. Miura, M. et al. (1993) Cell 75, 653-60.
  4. Kuida, K. et al. (1995) Science 267, 2000-3.
  5. Li, P. et al. (1995) Cell 80, 401-11.
  6. Feng, Q. et al. (2004) Genomics 84, 587-91.
  7. Martinon, F. et al. (2002) Mol Cell 10, 417-26.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意，否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件，除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受， 否书均被拒书，并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明， 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的， 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专，且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的， 或专专售（专独或作专专成）或其他商专目的而专专专品，均需要 CST 的专独专可。客专：(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品，或使用专品制造任何商专专品，(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专，或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专， (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专，(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品， (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
所有其他商标均属各自所有者专有。访问我们的商标信息页面。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink