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PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet
一抗
抗体对

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet #79781

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PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 1

使用 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体,对血清饥饿过夜之后经抗人 IgM(12 ug/ml,10 分钟)处理的 Ramos 细胞的 Phospho-Btk (Tyr223) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% input,泳道 2 是 兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 是 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体 (1:50),而泳道 4 是 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体 (1:100)。使用 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 2

根据 Cell Signaling Technology 流式备选实验步骤,对人体全血进行固定、裂解和通透,并使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 进行染色。使用 CD3-PE 和 CD19-APC 对样本进行共染色,以分别区分 T 细胞亚群和 B 细胞亚群。B(红色)和 T(蓝色)细胞群门被应用于描绘 Btk 的平均荧光强度的直方图。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 3

在 Leica® Bond™ Rx 上使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人鳞状肺癌细胞进行免疫组织化学分析。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 4

使用 Phospho-Btk (Tyr23) (D1D2Z) 兔单克隆抗体(上图)或 Btk (D6H5) 兔单克隆抗体 #8547(下图),对血清饥饿过夜之后经载体处理(通道 1)、以抗人 IgM 处理(12 μg/ml,10分钟;通道2)或在抗 IgM 处理前使用 Ibrutinib #16483(1μM,60 分钟)预处理(通道 3)的 Daudi 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 5

使用 Btk (D3H5) 兔单克隆抗体(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 Daudi 细胞(绿色)和 Jurkat 细胞(蓝色)进行流式细胞分析。抗兔 IgG (H+L)、F(ab’)2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 6

使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。注意炎症细胞的染色。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 7

使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞淋巴瘤进行免疫组织化学分析。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 8

使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠进行免疫组织化学分析。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 9

使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌进行免疫组织化学分析。注意炎症细胞的染色。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 10

使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的细胞沉淀物、Ramos(左图)或 Jurkat(右图)进行免疫组织化学分析。

PhosphoPlus® Btk (Tyr223) Antibody Duet: 图像 11

使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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产品说明

Cell Signaling Technology (CST) 的 PhosphoPlus® Duets 为评估蛋白激活状态提供了一种方法。每个 Duet 都包含针对靶标的激活状态和总蛋白抗体。根据这些抗体在特定应用中的出色表现,将其从 CST 提供的产品中选择出来。

背景

Bruton 酪氨酸激酶 (Btk) 是细胞质酪氨酸激酶 Btk/Tec 家族的成员。与其他 Btk 家族成员一样,它含有一个 pleckstrin 同源性 (PH) 结构域以及 Src 同源性 SH3和 SH2 结构域。Btk 在 B 细胞发育中发挥重要作用 (1,2)。各种配体激活 B 细胞的同时,Btk 膜转位受到其 PH 结构域与磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸结合的介导 (3-5)。Btk 定位于细胞膜后具有活性并瞬间磷酸化两个酪氨酸残基 Tyr551 和 Tyr223激活环中的 Tyr551 位点被 Src 家族酪氨酸激酶转磷酸化导致在 SH3 结构域内的 Tyr223 位点的自磷酸化,这对 B 细胞的完全激活非常重要 (6,7)。PKCβ 通过磷酸化 Btk 的 Ser180 位点而负向调控 Btk 的激活,并导致了细胞膜招募能力降低、磷酸根转移和后续的激活8。PKC 抑制信号可能是 B 细胞受体信号转导阈值维持最佳 Btk 活性的重要决定因素 (8)。

  1. Khan, W.N. (2001) Immunol Res 23, 147-56.
  2. Lewis, C.M. et al. (2001) Curr Opin Immunol 13, 317-25.
  3. Salim, K. et al. (1996) EMBO J 15, 6241-50.
  4. Rameh, L.E. et al. (1997) J Biol Chem 272, 22059-66.
  5. Várnai, P. et al. (1999) J Biol Chem 274, 10983-9.
  6. Rawlings, D.J. et al. (1996) Science 271, 822-5.
  7. Park, H. et al. (1996) Immunity 4, 515-25.
  8. Kang, S.W. et al. (2001) EMBO J 20, 5692-702.

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Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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