反应性 | M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 22-28、50-55 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
小鼠, 大鼠
使用与来自小鼠/大鼠的 BNIP3 的 Ser60 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用肽亲和力色谱对抗体进行纯化。
BNIP3(Bcl-2/E1B-19kDa 相互作用蛋白3)是含有 Bcl-2 同源性 3 (BH3) 结构域和羧基末端跨膜 (TM) 结构域的促凋亡线粒体蛋白和 Bcl-2 家族成员 (1-3)。尽管 BNIP3 的预测分子量约22 kDa,但它在 SDS-PAGE 上的图谱不规则,并且包括一个约 60 kDa 的条带,该条带可能是未还原的二聚体形式 (2)。BNIP3 与抗凋亡家族成员 Bcl-2、Bcl-xL 和腺病毒同源物 E1B-19kDa 结合。BNIP3 与仅含有 BH3 结构域的其他 Bcl-2 家族成员的区别在于,TM 结构域,而非 BH3 结构域,是线粒体导引作用和促凋亡活性需要的 (4)。除凋亡之外,BNIP3 也已经涉及坏死 (5) 和自噬 (6-11)。在低氧条件下,BNIP3 可以通过破坏 Bcl-2-Beclin-1 复合体,诱导线粒体自噬 (mitophagy) (9)。BNIP3 还可以通过触发 E3 泛素连接酶 Parkin 转位至线粒体 (10) 或通过直接结合自噬体上的 LC3 (11),促进线粒体自噬。BNIP3 还可以定位至内质网 (ER),在那里,它可以选择性地诱导自噬性清除 ER (ERphagy) (11)。低氧条件下 BNIP3 表达增加主要受转录因子 HIF-1α 调节 (12-14)。已经在几个类型的癌细胞中观察到 BNIP3 启动子由甲基化沉默并且这可能在它们的生存中发挥重要作用 (14-18)。
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