反应性 | H M R Mk |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 23 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与人 BCL2L10 蛋白 Pro115 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白质 A 和肽亲和色谱纯化抗体。
Bcl-2 家族由进化上保守的多种蛋白质组成,这些蛋白质含有通过控制线粒体膜通透性和细胞色素 C 释放调节凋亡的 Bcl-2 同源结构域 (BH) (1-3)。已经鉴定到介导蛋白质相互作用的四种 BH 结构域 (BH1-4)。基于功能和序列同源性,该家族可以划分成三组:促存活成员包括 Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1、A1 和 Bcl-w;促凋亡蛋白包括 Bax、Bak 和 Bok,并且“仅含 BH3”蛋白包括 Bad、Bik、Bid、Puma、Bim、Bmf、Noxa 和 Hrk。促进死亡的和抑制死亡的 Bcl-2 家族成员之间的相互作用导致其中促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的比率控制细胞转归的变阻器模型 (4)。因此,促存活成员通过结合于并拮抗促死亡成员而执行其行为。通常,“仅含 BH3 成员”可以结合于并拮抗促存活蛋白,导致凋亡增加 (5)。尽管这个系统或许存在一些冗余性,但这些家族成员中许多成员的组织特异性、转录调节作用和翻译后调节作用可以解释不同的生理学作用。
Bcl-2-like 10 (BCL2L10),在小鼠中称为 Diva 或 Boo (6,7),在人中称为 Bcl-B (8),是具有一些独特性质的 Bcl-2 家族成员。在多个胚胎组织中检测到小鼠 mRNA 的表达,但限于成年卵巢和睾丸 (6,7);而人 Bcl-B 似乎有更加广泛的表达 (8)。BCL2L10 包括 BH1、2 和 4 结构域,以及一个羧基末端跨膜结构域。但部分研究指出 BCL2L10 中存在促凋亡的 BH3 结构域,这与那些 BH3 结构域不完整或缺失的研究结果相矛盾 (7-9)。类似地,部分研究指出 BCL2L10 能诱导凋亡 (6,9),而其他数据显示其在抑制细胞死亡方面发挥作用 (7,8,10)。BCL2L10 通过与其他 Bcl-2 家族成员的差异性结合以及与凋亡体蛋白 Apaf-1 的相互作用来发挥作用 (6,7)。尽管在小鼠中少量表达,但是 Diva 敲除小鼠可生育,且并未显示出明显发育缺陷 (11)。
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