反应性 | H M R Mk Pg |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 150 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人, 小鼠, 大鼠, 猴, 猪
使用与人 BAG6 蛋白羧基末端周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。通过蛋白质 A 和肽亲和色谱纯化抗体。
BAG6(BCL2 相关永生基因-6)也称为 BAT3(HLA-B 相关转录基因 3),它是一种最初在人体主要组织相容性复合体 III 类区域中发现的基因,但之后发现它显示蛋白质伴侣分子的活性。BAG6 与其它伴侣分子蛋白和泛素连接酶结合,调节蛋白质稳定性,将尾端锚定膜蛋白插入到内质网中 (1-3)。BAT3 复合体 由 BAG6、TRC35 和 Ub14a 组成,位于合成膜蛋白的核糖体,可促进 TRC40 捕获尾端锚定蛋白,并将新生蛋白质插入内质网膜 (4,5)。BAG6 还通过内质网相关降解和泛素-蛋白酶体系统在清除错误折叠或错误定位肽段的细胞中发挥重要作用 (1,6,7)。BAG6 还通过与 DERLIN2 的相互作用作为糖蛋白的伴侣分子起作用 (8)。
除了作为伴侣分子,BAG6 还与染色质结构和基因表达的调节有关。例如,BAG6 和 SET1A 作为 BORIS 的结合伴侣,影响染色质结构和基因表达 (9)。同样,BAG6 表达升高会够诱导 p300 介导的 p53 乙酰化,这一过程为 DNA 损伤应答所需 (10)。BAG6 还发现可与 TGF-β 相互作用,这样可作为TGF-β1 刺激 1 型胶原表达的正调控蛋白 (11)。BAG6 还通过与小羧基末端结构域磷酸酶 (SCP) 相互作用去磷酸化 SMAD 蛋白质,导致 BMP 介导事件的终结,从而抑制骨形态发生蛋白 (BMP) 的信号转导 (12)。
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