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70751
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合
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Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit #70751

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Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。HCT 116细胞被证实含有可导致 UVRAG 内源性表达水平显著降低的单等位基因移码突变 (11)。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 Atg9A (D4O9D) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 PIK3R4 Antibody 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 4
使用 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 PI3 Kinase Class III (D9A5) Rabbit mAb 对小鼠脑和 C6 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Bif-1 Antibody 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 7
使用 Atg14 Antibody #5504（上）或 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb #2128（下）对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Atg14 siRNA I #6286 (+) 或 SignalSilence® Atg14 siRNA II #6287 (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Atg14 Antibody 可确认 Atg14 的表达沉默，而 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb 则用作上样对照。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 8
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 Rubicon (D9F7) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或经构建表达的人 UVRAG (hUVRAG; +) 转染的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 Atg9A (D4O9D) Rabbit mAb（上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) 或 SignalSilence® Atg9A siRNA I #7051 (+) 转染的 RD 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Atg9A (D4O9D) Rabbit mAb 可证实 Atg9A 表达沉默，而 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 用作上样对照。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb #3495（上）或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125（下）对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Beclin-1 siRNA I #6222 (+) 或 SignalSilence® Beclin-1 siRNA II (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb 可确认 Beclin-1 的表达沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作观察上样量和 Beclin-1 siRNA 的特异性。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 Atg14 Antibody 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 14
使用 Rubicon (D9F7) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或经 人 Rubicon (hRubicon, +) 转染的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Rubicon 构建体由 University of California, Berkeley, CA 的 Qing Zhong 博士惠赠。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 15
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb（泳道 3）对 PANC-1 细胞提取物中的 UVRAG 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype control #3900（泳道 2）或 Atg9A (D4O9D) Rabbit mAb（泳道 3），对来自 Hep G2 细胞提取物的 Atg9A 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Atg9A (D4O9D) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit: Image 17
使用 Atg14 Antibody 对转染空载 (-) 或转染 GFP-Atg14 (+) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。GFP-Atg14 结构由 University of California, Berkeley CA 的 Qing Zhong 博士友情提供。
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70751T		 1 个试剂盒（8 x 20 微升）

定制制剂

产品说明

Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit，提供一种经济的方法来检测自噬体形成和成熟过程中的靶标蛋白。该试剂盒包含足量的抗体，每种一抗可进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Autophagy Vesicle Nucleation Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其各自靶标的内源水平。Rubicon (D9F7) Rabbit mAb 可检测在 55 kDa 处的来源不明的条带。

来源/纯化

使用与人 PI3 激酶 III 类蛋白 Lys630 周围的残基、人 Beclin-1 蛋白 Thr72 周围的残基、人 UVRAG 蛋白 Gly502 周围的残基、人 Rubicon 蛋白 Leu210 周围的残基或人 Atg9A 蛋白 Gly780 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
使用与人 PIK3R4 蛋白 Gly825 周围的残基、人 Atg14 蛋白 Val215 周围的残基或人 Bif-1 蛋白 Gly129 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

背景

自噬是自噬溶酶体降解大部分细胞浆内容物的一种分解代谢过程 (1,2)。自噬一般在营养匮乏的条件下被激活，但也与许多生理过程有关，包括发育、分化、神经退行性疾病、感染和癌症 (3)。已在酵母中大量发现自噬的分子机制，该机制还受大量自噬相关 (Atg) 基因的调节。这些蛋白参与自噬体的形成，自噬体是被转运到溶酶体中进行降解的胞质液泡。PIK3R4/PI3K III 类复合体与 Beclin-1 相互作用，在自噬的几个阶段发挥作用。Atg14 与 PIK3R4、PI3K III 类和 Beclin-1 组成复合体，将刺激自噬的形成。UVRAG 蛋白与 Atg14 竞争结合蛋白Beclin-1，与 PIK3R4、PI3K III 类和 Beclin-1 组成调节自噬体成熟的互斥复合体。在 Beclin-1 结合蛋白 Rubicon (4,5) 存在的情况下，自噬体成熟受损。要通过 Beclin-1/UVRAG 和营养水平 (6) 来激活和调节 PI3K III 类，PIK3R4 共表达是必要的。Bif-1 直接与 UVRAG 结合，然后与 Beclin-1 形成复合体，从而使自噬体成熟所需要的 PI3 激酶类 III 类/Vps34 的活性增加(7)。正如在营养不足的情况下所见，抑制 GSK-3β 会引起 Bif-1 表达增加，促使自噬性细胞死亡 (8)。Atg9A 是自噬体启动和扩大所需的整合型膜蛋白 (9,10)。募集 Atg9A 至自噬体膜是动态和短暂的，因为 Atg9A 还在称作 ω 的自噬相关结构、反面高尔基体网络 (TGN) 和内体之间循环，并且从未变成自噬体膜的稳定组分 (9,11)。未充分阐明 Atg9A 转运的精确调节，然而提出它涉及 p38 丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 结合蛋白 p38IP 和 Beclin-1-结合蛋白 Bif-1 (12,13)。
  1. Reggiori, F. and Klionsky, D.J. (2002) Eukaryot Cell 1, 11-21.
  2. Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ 12 Suppl 2, 1509-18.
  3. Levine, B. and Yuan, J. (2005) J Clin Invest 115, 2679-88.
  4. Zhong, Y. et al. (2009) Nat Cell Biol 11, 468-76.
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  6. Yan, Y. et al. (2009) Biochem J 417, 747-55.
  7. Takahashi, Y. et al. (2007) Nat Cell Biol 9, 1142-51.
  8. Yang, J. et al. (2010) J Cell Sci 123, 861-70.
  9. Young, A.R. et al. (2006) J Cell Sci 119, 3888-900.
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  11. Orsi, A. et al. (2012) Mol Biol Cell 23, 1860-73.
  12. Webber, J.L. and Tooze, S.A. (2010) EMBO J 29, 27-40.
  13. Takahashi, Y. et al. (2011) Autophagy 7, 61-73.

通路和蛋白

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KARPAS 细胞系来源：剑桥大学 Abraham Karpas 博士。
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