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96882
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit #96882

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Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 1
使用 Phospho-CENP-A (Ser7) Antibody(上图)或 CENP-A Antibody #2186(下图),对停留在 S 期或有丝分裂的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。处于 S 期的细胞用胸腺嘧啶核苷 (2 mM) 处理 12 小时,并洗涤 3 次,放入正常生长培养基 10 小时,额外用胸腺嘧啶核苷处理 12 小时,然后收集细胞。有丝分裂的细胞用胸腺嘧啶核苷处理 12 小时,并洗涤 3 次,再用 paxitaxel(终浓度 500 nM)处理 16 小时。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 2
使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D11A13) XP® Rabbit mAb (上)或 Aurora B/AIM1 Antibody #3094(下),对 HeLa、L929 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析,三种细胞用 4 mM 的羟基脲处理 20 小时以诱导 G1/S 期,或用 100 nM paclitaxel 或100 ng/ml nocodazole 处理 20 小时以诱导 G2/M 期。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 3
使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb #3377(上)或 Histone H3 Antibody #9715(下),对未处理或使用 Nocodazole(100 ng/ml 处理 18 小时)处理的 HeLa 细胞提取物,进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性的显示是进一步使用 λ-磷酸酶处理细胞裂解物。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 4
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 5
使用 Phospho-TACC3 (Ser558) (D8H10) XP® Rabbit mAb 对未处理的 (-) 或用胸腺嘧啶阻断同步在有丝分裂(2 mM,17 小时)后用 nocodazole 处理(100 ng/ml,24 小时)(+) 的 HT-29 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 6
使用 Phospho-PLK1 (Thr210) (D5H7) Rabbit mAb(上)或总的 PLK1 (208G4) Rabbit mAb #4513(下),对在有丝分裂中未同步或同步的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。有丝分裂同步是通过胸腺嘧啶阻断进行的,随后释放进入 Nocodazole 和有丝分裂摆脱。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 7
对未处理或使用 100 ng/ml nocodazole 处理 4 小时后在分裂中期同步的 CHO 和 HeLa 细胞提取物,进行蛋白质印迹分析,随后通过有丝分裂的摆脱作用分离中期细胞。蛋白印迹用 Phospho-Histone H3 (Ser28) Antibody #9713(上)或 Histone H3 Antibody #9715(下)探测。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 8
使用 Phospho-CENP-A (Ser7) Antibody(绿色荧光,在合成图像中似乎呈白色)和 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116(红色)对有丝分裂的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。Phospho-CENP-A 信号定位于中期平板中的亮斑。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 9
使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb(绿色)、 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116(红色)和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706(蓝色),对 HT-1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 10
使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb(绿色),对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 11
使用 Phospho-TACC3 (Ser558) (D8H10) XP® Rabbit mAb(绿色),对未处理(左)或使用 λ 磷酸酶处理(右)的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 12
使用 Phospho-PLK1 (Thr210) (D5H7) Rabbit mAb,对在有丝分裂中未同步或同步的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。该抗体按说明用 PLK1 phospho-Thr210 肽或非磷酸化肽进行预孵育。有丝分裂同步是通过胸腺嘧啶阻断进行的,随后释放进入 Nocodazole 和有丝分裂摆脱。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 13
使用 Phospho-Histone H3 (Ser28) Antibody(绿色),对出生后 1 天的大鼠脑进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5 (DNA 荧光染料)。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 14
使用与碘化丙啶(DNA 含量)相对比的 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb,对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。框内细胞群表明 phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) 阳性细胞。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 15
与碘化丙啶(DNA 含量)相比较,使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb,对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。框内细胞群是 Phospho-Histone H3 (Ser10) 阳性细胞。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 16
使用 Phospho-Histone H3 (Ser28) Antibody(绿色),对 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5 (DNA 荧光染料)。
Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit: Image 17
与碘化丙啶(DNA 含量)相比较,使用 Phospho-Histone H3 (Ser28) Antibody 对未处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。框内细胞群是 phospho-Histone H3 阳性细胞。
To Purchase # 96882T
产品货号 规格 价格 库存
96882T
1 个试剂盒(6 x 20 微升)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-CENP-A (Ser7) Antibody 2187 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
H 17 兔 
Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb 3377 20 µl
  • WB
  • IF
  • F
H M R Mk Z 17 兔 IgG
Phospho-Histone H3 (Ser28) Antibody 9713 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
H M Hm Dm 17 兔 
Phospho-PLK1 (Thr210) (D5H7) Rabbit mAb 9062 20 µl
  • WB
  • IP
H 62 兔 IgG
Phospho-TACC3 (Ser558) (D8H10) XP® Rabbit mAb 8842 20 µl
  • WB
  • IF
H 140 兔 IgG
Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb 2914 20 µl
  • WB
  • IF
  • F
H M R 35, 40, 48 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来研究细胞周期中的 G2/M 期。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

Aurora A/B Substrate Antibody Sampler Kit 中的每种抗体检测其各自修饰特异性靶标蛋白的内源水平。当 Lys9 乙酰化或甲基化时,Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb 无法检测磷酸化的 Ser10。

来源/纯化

使用与其各自磷酸化特异性靶标周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆和多克隆抗体。Phospho-CENP-A (Ser7) Antibody 通过肽亲和层析纯化,Phospho-Histone H3 (Ser28) Antibody 通过蛋白 A 和肽亲和层析纯化。

背景

Aurora 激酶属于有丝分裂丝氨酸/苏氨酸激酶的高度保守家族,在哺乳动物中鉴定出三个成员:Aurora A、B 和 C (1,2)。研究表明,时序表达模式和 Aurora 激酶在有丝分裂亚细胞定位与有丝分裂结构有关。Aurora 激酶的功能可作用于 G2 期到胞质分裂,有可能涉及重要的细胞周期事件,如中心体复制、染色体双向定位和隔离、卵裂沟的定位和脱离 (3)。Aurora A 在中心体上被发现,沿着有丝分裂的纺锤体微管以及在有丝分裂增殖细胞的细胞浆中分布。Aurora A 蛋白水平在 G1 期和 S 期很低,在细胞周期 G2/M 期达到最高。Aurora A 在催化域 Thr288 位点的磷酸化会增加激酶活性。Aurora A 可参与中心体分离、成熟和纺锤体装配和稳定性。Aurora B 蛋白也在细胞周期 G2/M 期表达最多;Aurora B 激酶活性在有丝分裂的中期到末期时最高。前期时 Aurora B 在染色体定位到纺锤体之前与之结合。Aurora B 通过控制微管-着丝粒的结合和胞质分裂调控染色体分离。G2/M期 Aurora A 和 Aurora B 的表达与组蛋白 H3 的磷酸化高度一致 (4,5);研究人员已经发现多种人类癌症中这些激酶均呈过表达 (2,4)。在前期到胞质分裂期,Aurora C 都位于中心体上, mRNA 和蛋白水平都在 G2/M 期达到最高。尽管典型的 Aurora C 蛋白的表达局限在睾丸中,但研究发现多种癌细胞系中也有过表达的 Aurora C (6)。
卷曲螺旋转化酸 (TACC) 蛋白是以一个蛋白家族,特征是在羧基末端有大约 200 个氨基酸的一种常见卷曲螺旋基序 (7)。哺乳细胞的 TACC3 在 Ser558 位点由 Aurora A 磷酸化时,可定位到有丝分裂纺锤体并可增加微管的稳定性 (8,9)。
在有丝分裂前期,CENP-A 在 Ser7 位点的 Aurora A 依赖性磷酸化作用,可确保将 Aurora B 正确定位至前中期的内部着丝粒,同时也是有丝分裂期间合适动粒/微管附着和染色体排布所必不可少 (10)。Aurora B 还可将靶标定位到 CENP-A 上的 Ser7 ,而 CENP-A 可反过来在胞质分裂期间调节 Aurora B 的活性 (11)。Aurora B 可对组蛋白 H3 的 Ser10 和 Ser28 位点磷酸化,与有丝分裂染色质缩合一致 (12)。
在检查点依赖性细胞周期停滞后,Aurora A 对 PLK 上 Thr210 位点的磷酸化,可促使细胞进入有丝分裂 (13)。Aurora 激酶活性需要保守苏氨酸残基 Thr288 (Aurora A)、Thr232 (Aurora B) 和 Thr195 (Aurora C) 的自磷酸化 (14)。
  1. Warner, S.L. et al. (2003) Mol Cancer Ther 2, 589-95.
  2. Katayama, H. et al. (2003) Cancer Metastasis Rev 22, 451-64.
  3. Andrews, P.D. et al. (2003) Curr Opin Cell Biol 15, 672-83.
  4. Pascreau, G. et al. (2003) Prog Cell Cycle Res 5, 369-74.
  5. Crosio, C. et al. (2002) Mol Cell Biol 22, 874-85.
  6. Kimura, M. et al. (1999) J Biol Chem 274, 7334-40.
  7. Gergely, F. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A 97, 14352-7.
  8. Kinoshita, K. et al. (2005) J Cell Biol 170, 1047-55.
  9. Schneider, L. et al. (2007) J Biol Chem 282, 29273-83.
  10. Kunitoku, N. et al. (2003) Dev Cell 5, 853-64.
  11. Zeitlin, S.G. et al. (2001) J Cell Biol 155, 1147-57.
  12. Goto, H. et al. (2002) Genes Cells 7, 11-7.
  13. Macůrek, L. et al. (2008) Nature 455, 119-23.
  14. Willems, E. et al. (2018) Cell Div 13, 7.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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