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69501
PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet
一抗
抗体对

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet #69501

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PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 1

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(绿色)对未经(左图,低表达)或经 Torin 1 #14379(250 nM,2 小时;中间-左图,高表达)处理的 HCT 116 Atg14 野生型细胞、经 Torin 1(中间-右图,阴性)处理的 HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞或经 λ-磷酸酶(2 小时,右图,阴性)进行后处理的 HCT 116 Atg14 野生型细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞由明尼苏达州明尼阿波利斯明尼苏达大学的 Do-Hyung Kim 博士惠赠。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 2

对 HCT 116 细胞提取物 Atg14 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 沉淀,泳道 3 为 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb。使用 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 发生反应。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 3

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对转染空载 (-) 或转染表达带有 GFP 标签的人 Atg14 蛋白 (hAtg14-GFP; +) 或小鼠 ULK1 蛋白 (mULK1; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白印迹分析。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 4

使用 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #84576(下)对 HCT 116 和 HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞提取物进行蛋白质印迹分析。HCT 116/Atg14 shRNA 细胞由 University of Minnesota, Minneapolis, MN Do-Hyung Kim 博士友情提供。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 5

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb #96752(中间)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb(下图),对未经处理 (-) 或用 Earle's Balanced Salt Solution(EBSS,2 小时;+)和 ULK1 抑制剂 SBI-0206965 #29089(50 μM,2 小时;+)(如图所示)饥饿的 HCT 116 和 HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞的提取物进行蛋白印迹分析。HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞由明尼苏达州明尼阿波利斯明尼苏达大学的 Do-Hyung Kim 博士惠赠。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 6

使用 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 7

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb #96752(中图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经 (-) 或已经 λ-磷酸酶和牛小肠磷酸酶(λ-磷酸酶/CIP ;+) 处理的 HCT 116 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

PhosphoPlus® Atg14 (Ser29) Antibody Duet: 图像 8

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb #96752(中间)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或用 Earle's Balanced Salt Solution(EBSS,2 小时)饥饿的 Saos-2 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

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Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb 92340 100 µl H M R 65 兔 IgG
Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb 96752 100 µl H M R 65 兔 IgG

试剂盒使用信息

实验步骤

产品说明

Cell Signaling Technology (CST) 的 PhosphoPlus® Duets 为评估蛋白激活状态提供了一种方法。每个 Duet 都包含针对靶标的激活状态和总蛋白抗体。根据这些抗体在特定应用中的出色表现,将其从 CST 提供的产品中选择出来。

背景

自噬是自噬溶酶体降解大部分细胞浆内容物的一种分解代谢过程 (1,2)。自噬一般在营养匮乏的条件下被激活,但也与许多生理过程有关,包括发育、分化、神经退行性疾病、感染和癌症 (3)。已在酵母中大量发现自噬的分子机制,该机制还受大量自噬相关 (Atg) 基因的调节。这些蛋白参与自噬体的形成,自噬体是被转运到溶酶体中进行降解的胞质液泡。III 型磷酸肌醇 3-激酶 (PI3K) Vps34 可调节液泡转运和自噬 (4,5)。Vsp34 可结合许多蛋白,包括 p105/Vps15、Beclin-1, UVRAG、Atg14 和 Rubicon,从而确定 Vsp34 的功能 (6-12)。Atg14 和 Rubicon 根据其结合 Beclin-1 的能力进行鉴定,并在独特复合体中发挥抑制作用 (9-12)。位于内体和溶酶体的 Rubicon 会抑制 Vps34 脂质激酶活性;敲除 Rubicon 会增强自噬和内吞转运 (11,12)。相比之下,Atg14 位于自噬体、隔离膜和内质网,并可增强 Vps34 活性。敲除 Atg14 会抑制饥饿诱导的自噬 (11,12)。

丝氨酸/苏氨酸激酶 ULK1 在 Ser29 位点磷酸化 Atg14,进而促进自噬体形成 (13)。

  1. Reggiori, F. and Klionsky, D.J. (2002) Eukaryot Cell 1, 11-21.
  2. Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ 12 Suppl 2, 1509-18.
  3. Levine, B. and Yuan, J. (2005) J. Clin. Invest. 115, 2679-88.
  4. Corvera, S. (2001) Traffic 2, 859-66.
  5. Yan, Y. and Backer, J.M. (2007) Biochem Soc Trans 35, 239-41.
  6. Stack, J.H. et al. (1995) J Cell Biol 129, 321-34.
  7. Zeng, X. et al. (2006) J Cell Sci 119, 259-70.
  8. Liang, C. et al. (2006) Nat Cell Biol 8, 688-99.
  9. Itakura, E. et al. (2008) Mol Biol Cell 19, 5360-72.
  10. Sun, Q. et al. (2008) Proc Natl Acad Sci U S A 105, 19211-6.
  11. Zhong, Y. et al. (2009) Nat Cell Biol 11, 468-76.
  12. Matsunaga, K. et al. (2009) Nat Cell Biol 11, 385-96.
  13. Park, J.M. et al. (2016) Autophagy 12, 547-564.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PhosphoPlus 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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