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59633
AS160 Signaling Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合
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AS160 Signaling Antibody Sampler Kit #59633

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AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 1

使用 AS160 (C69A7) Rabbit mAb 对 HepG2、RD 和 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 Phospho-AS160 (Ser318) (D3D11) Rabbit mAb (上图) 或 AS160 (C69A7) Rabbit mAb #2670(下图) 对未经处理或经胰岛素 (150nM,15分钟) 或 hIGF-I #8917 (100ng/ml,15分钟) 处理的血清饥饿 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。可通过 λ 磷酸酶处理验证该抗体的磷酸特异性。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 Phospho-AS160 (Ser588) (D8E4) Rabbit mAb (上图) 或 AS160 (C69A7) Rabbit mAb #2670(下图) 对未经处理或经 hIGF-I #8917(100ng/ml,15分钟) 处理的血清饥饿 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。可通过 λ 磷酸酶处理验证该抗体的磷酸特异性。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 Phospho-AS160 (Thr642) (D27E6) Rabbit mAb (上图) 或 AS160 (C69A7) Rabbit mAb #2670 (下图)，对未经处理 (-) 或已经胰岛素(150nM，15分钟) 处理的血清饥饿 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。可通过 λ 磷酸酶处理验证该抗体的磷酸特异性。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用与非特异性阴性对照抗体（红色）相对比的 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb（蓝色）对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 6

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® 兔单克隆抗体（实线）对未经（绿色）或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经（绿色）或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM、1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 8

一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb（绿色）对 C2C12 细胞（LY294002 处理（左）或胰岛素处理（右））进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5™（DNA 荧光染料）。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 10

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb （绿色）对经胰岛素（100 nM，15 分钟；左图）或 LY294002 #9901（50 μM，2 小时；右图）处理的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（绿色），对经 LY294002 处理（左）或经胰岛素处理（右）的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb （泳道 3）对 Jurkat 细胞提取物磷酸 Akt (Thr308) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（左）或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559（右），对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意：PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 15

在对照肽（左）或 Akt (pan) Blocking Peptide #1085（右）存在下，使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb（上图）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下图）对未经处理 (-) 或已经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913（100 ng/ml，5 分钟；+）处理的 NIH/3T3 细胞与未经处理的 (-) LNCaP 和 PC-3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060，对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112（左）和 TBST/5% Normal Goat Serum（右）对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 18

在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 （石蜡包埋的 LNCaP 细胞（未处理（左）或 LY294002 处理（右）））上使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白及来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（未经处理（左）或经 LY294002 处理（右）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。（组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠）

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 24

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 25

对经 Calyculin A #9902（100nM，30 分钟）处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb，泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit: 图像 26

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb（上）或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691（下），对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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产品说明

AS160 Signaling Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测与 AS160 信号转导通路有关的特定组分。该试剂盒含有足量的一抗，每种抗体至少可进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

AS160 (C69A7) Rabbit mAb 可检测 AS160 总蛋白的内源水平。Phospho-AS160 (Ser318) (D3D11) Rabbit mAb 仅当 Ser318 磷酸化后可识别内源水平的 AS160 蛋白。Phospho-AS160 (Ser588) (D8E4) Rabbit mAb 仅当 Ser588 磷酸化后可识别内源水平的 AS160 蛋白。Phospho-AS160 (Thr642) (D27E6) Rabbit mAb 仅当 Thr642 磷酸化后可识别内源水平的 AS160 蛋白。Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 可检测 Akt 总蛋白的内源水平。该抗体不与其他相关蛋白发生交叉反应。Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP®Rabbit mAb 仅在 Thr308 磷酸化后可识别内源水平的 Akt1 蛋白。该抗体在 Thr309 磷酸化后也可识别内源水平的 Akt2 蛋白，或者当 Thr305 磷酸化后可识别内源水平的 Akt3 蛋白。Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb 检测仅在 Ser473 磷酸化后的内源水平的 Akt。

来源/纯化

使用与人 AS160 的 Ala195 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 AS160 蛋白中 Ser318 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 AS160 蛋白中 Ser588 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 AS160 蛋白的 Thr642 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 Akt 羧基末端序列残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Akt1 蛋白的 Thr308 周围残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Akt 的 Ser473 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

胰岛素是控制关键的能量功能（如葡萄糖和脂质代谢）的一种主要激素。胰岛素能结合并激活胰岛素受体（IR）酪氨酸激酶，能够募集并磷酸化各种接头蛋白。胰岛素及其受体能启动的信号转导通路，并且可通过 GLUT4 葡萄糖转运体从细胞浆转位至质膜刺激肌肉细胞和脂肪细胞葡萄糖摄取。（1）。Akt 丝氨酸/苏氨酸激酶（AS160，TBC1D4）的一个160 kDa 的底物是 Rab GTP 酶激活的蛋白，它能调节胰岛素刺激的 Glut4 转运。AS160 可在许多组织中表达，包括脑、肾、肝、棕色和白色脂肪组织 (2)。体内​在 AS160 发现多个 Akt 磷酸化位点，在胰岛素处理后，这五个位点（Ser318、Ser570、Ser588、Thr642、Thr751）的磷酸化增加 (2,3)。使用重组 AS160 的研究表明，胰岛素刺激的 AS160 磷酸化 是 Glut4 转位 (3) 的一个关键步骤，并且在一些2 型糖尿病患者中减少 (4)。14-3-3 调节蛋白和在 Thr642 位点被磷酸化的 AS160 之间的相互作用是 Glut4 转位的一个必要步骤 (5)。AMPK 对 AS160 的磷酸化作用也参与浓度诱导的 Glut4 转位调控过程 (6)。

Akt（也称 PKB 或 Rac）在控制存活和凋亡中发挥关键作用 (7-9)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活，并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (8,9)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (10) ，以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。之前难以捉摸、负责 Akt 在 Ser473 位点的磷酸化的 PDK2 已被确定为雷帕霉素敏感复合体（带有 rictor 和 Sin1）的哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) (11,12)。

  1. Watson, R.T. and Pessin, J.E. (2006) Trends Biochem. Sci. 31, 215-22.
  2. Kane, S. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277, 22115-8.
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  9. Franke, T.F. et al. (1995) Cell 81, 727-36.
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  11. Sarbassov, D.D. et al. (2005) Science 307, 1098-101.
  12. Jacinto, E. et al. (2006) Cell 127, 125-37.

通路和蛋白

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