试剂盒使用信息
实验步骤
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2670: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠)
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4060: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法, 流式细胞术
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4691: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(琼脂糖), 免疫组织化学(石蜡), 免疫荧光法, 流式细胞术
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7074: 蛋白印迹实验
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8619: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠)
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8730: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠)
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8881: 蛋白印迹实验
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13038: 蛋白印迹实验, 免疫沉淀法(磁珠), 免疫荧光法, 流式细胞术
产品说明
AS160 Signaling Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测与 AS160 信号转导通路有关的特定组分。该试剂盒含有足量的一抗,每种抗体至少可进行两次蛋白质印迹实验。
特异性/灵敏度
AS160 (C69A7) Rabbit mAb 可检测 AS160 总蛋白的内源水平。Phospho-AS160 (Ser318) (D3D11) Rabbit mAb 仅当 Ser318 磷酸化后可识别内源水平的 AS160 蛋白。Phospho-AS160 (Ser588) (D8E4) Rabbit mAb 仅当 Ser588 磷酸化后可识别内源水平的 AS160 蛋白。Phospho-AS160 (Thr642) (D27E6) Rabbit mAb 仅当 Thr642 磷酸化后可识别内源水平的 AS160 蛋白。Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 可检测 Akt 总蛋白的内源水平。该抗体不与其他相关蛋白发生交叉反应。Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP®Rabbit mAb 仅在 Thr308 磷酸化后可识别内源水平的 Akt1 蛋白。该抗体在 Thr309 磷酸化后也可识别内源水平的 Akt2 蛋白,或者当 Thr305 磷酸化后可识别内源水平的 Akt3 蛋白。Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb 检测仅在 Ser473 磷酸化后的内源水平的 Akt。
来源/纯化
使用与人 AS160 的 Ala195 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 AS160 蛋白中 Ser318 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 AS160 蛋白中 Ser588 周围的残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 AS160 蛋白的 Thr642 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 Akt 羧基末端序列残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Akt1 蛋白的 Thr308 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 Akt 的 Ser473 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
背景
胰岛素是控制关键的能量功能(如葡萄糖和脂质代谢)的一种主要激素。胰岛素能结合并激活胰岛素受体(IR)酪氨酸激酶,能够募集并磷酸化各种接头蛋白。胰岛素及其受体能启动的信号转导通路,并且可通过 GLUT4 葡萄糖转运体从细胞浆转位至质膜刺激肌肉细胞和脂肪细胞葡萄糖摄取。(1)。Akt 丝氨酸/苏氨酸激酶(AS160,TBC1D4)的一个160 kDa 的底物是 Rab GTP 酶激活的蛋白,它能调节胰岛素刺激的 Glut4 转运。AS160 可在许多组织中表达,包括脑、肾、肝、棕色和白色脂肪组织 (2)。
体内在 AS160 发现多个 Akt 磷酸化位点,在胰岛素处理后,这五个位点(Ser318、Ser570、Ser588、Thr642、Thr751)的磷酸化增加 (2,3)。使用重组 AS160 的研究表明,胰岛素刺激的 AS160 磷酸化 是 Glut4 转位 (3) 的一个关键步骤,并且在一些2 型糖尿病患者中减少 (4)。14-3-3 调节蛋白和在 Thr642 位点被磷酸化的 AS160 之间的相互作用是 Glut4 转位的一个必要步骤 (5)。AMPK 对 AS160 的磷酸化作用也参与浓度诱导的 Glut4 转位调控过程 (6)。
Akt(也称 PKB 或 Rac)在控制存活和凋亡中发挥关键作用 (7-9)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活,并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (8,9)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (10) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。之前难以捉摸、负责 Akt 在 Ser473 位点的磷酸化的 PDK2 已被确定为雷帕霉素敏感复合体(带有 rictor 和 Sin1)的哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) (11,12)。
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通路与蛋白质
探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。
限制使用
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