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8696
Angiogenesis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Angiogenesis Antibody Sampler Kit #8696

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Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 1

对 HUVE 细胞进行共聚焦免疫荧光图像分析,而 HUVE 细胞为未经处理(左)或用 Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) #9943(右)刺激,然后用 Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb(上,绿色)和 VEGF Receptor 2 (55B11) Rabbit mAb #2479(下,绿色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经(绿色)或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903(50 μM、1 μM 和 10 μM,2 小时;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb(上)或 Src (36D10) Rabbit mAb #2109(下),对血清饥饿或经人 Platelet-Derived Growth Factor BB hPDGF-BB #8912 处理(100 ng/ml,15 分钟)的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 Phospho-FAK (Tyr397) (D20B1) Rabbit mAb(上)和 FAK Antibody #3285(下)对未经或经小牛肠道磷酸酶 (CIP) 处理的 A549细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用与非特异性阴性对照抗体(红色)相对比的 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb,对未经处理(蓝色)或经 anisomycin 处理(绿色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb(顶排)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(底排)与共染料 CD3 (UCHT1) Mouse mAb (APC Conjugate) #19881 对未经(左栏)或已经交联抗 CD3 + 抗 CD28(各 10 μg/ml,15 分钟;右栏)处理的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® 兔单克隆抗体(实线)或浓度匹配的兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900(虚线)对经 U0126(10 µM,2 小时;绿色)处理或经 TPA #4174 (200 nM,30 分钟;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 8

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 9

对未经处理(左)或经 VEGF 处理(右)的石蜡包埋的 HUVE 细胞进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 10

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(绿色),对经 LY294002 处理(左)或经胰岛素处理(右)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084(DNA 荧光染料)。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb(绿色),对未经处理(左)或经 anisomycin 处理(右)的 COS 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对经 U0126 #9903(10 µM,2 小时;蓝色)或 TPA #4174(200 nM,30 分钟;绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 用作二抗。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(绿色)和 S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb #2317(红色),对未经处理(上)或经 λ 磷酸酶处理(下)的果蝇卵泡进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 14

Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb 可特异性结合磷酸化的 VEGFR2,但不能结合其他磷酸化的酪氨酸激酶。使用 Phospho-VEGF Receptor-2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb(上)和 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411(下),对表达不同激活酪氨酸激酶蛋白的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。CKR/PAE 细胞(泳道 12 和 13)表达包含人 CSF-1 胞外结合域/小鼠 VEGF 受体 2 胞内域的嵌合受体 (7)。CSF-1 会刺激 VEGF 受体 2 结构域(泳道 12)Tyr1175 的磷酸化,这可通过 Phospho-VEGF Receptor-2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb 进行特异性检测。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(左)或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559(右),对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意:PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb(绿色),对血清饥饿(左)或 hEGF #8916处理(100 ng/mL,15 分钟)的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(绿色)和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色),对饥饿过夜,然后用 U0126 #9903(10 uM,2 小时;左)或 PDBu (Phorbol 12,13-Dibutyrate) #12808(100 nM,15 分钟;右)处理的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb(上)和 VEGF Receptor 2 (55B11) Rabbit mAb #2479(下),对未经处理或用 VEGF 刺激(50 ng/ml,2 分钟)的 HUVE 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060,对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112(左)和 TBST/5% Normal Goat Serum(右)对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 21

使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠细胞进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 22

在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠细胞(肿瘤细胞周围的正常细胞)进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 24

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 25

使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb,对未经处理(左)或经紫外线处理(右)的石蜡包埋的 293T 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 26

使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 27

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb,对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左)或经 LY294002 处理(右)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb(上)或 p38 MAPK Antibody # 9212(下),对未经处理或经紫外线处理的 COS 和 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 30

使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-EGF Receptor IHC Controls #8102 [未经处理(左)或经 EGF 处理(右)的石蜡包埋的 KYSE450 细胞沉淀物] 进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 31

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb on SignalSlide™ Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) IHC Controls #8103,(对 U0126 #9903(左)或 TPA # 4174(右)处理的石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞)进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 32

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 33

在放入 SDS(泳道 1 和 2)或 IP 溶解缓冲液(泳道 3,仅经 TPA 处理)之前,对未经处理 (-) 或经 TPA #4174 处理(100 nM,15 分钟;+)的血清饥饿 HeLa 细胞提取物进行免疫沉淀分析 (IP) / 蛋白质印迹分析。随后使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb(泳道 4)、PLCγ1 (D9H10) XP® Rabbit mAb #5690(泳道 5)或 Normal Rabbit IgG #2729(泳道 6)对 IP 裂解物进行免疫沉淀。使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。泳道 3 为 10 input。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 34

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 和 p44/42 MAPK (Erk1/2) (3A7) Mouse mAb #9107,对未经处理或经 U0126 #9903(10 µM,1 小时)或 TPA #4174(200 nM,10 分钟)处理的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 35

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。(组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠)

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 36

使用 Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb(上)或 PLCγ1 (D9H10) XP® Rabbit mAb # 5690(下),对未经处理 (-) 或经 hEGF #8916 处理(100 ng/mL,15 分钟;+)的血清饥饿 A-431 和 A549 细胞或未经处理的 (-) 或经 hPDGF-BB #8912 处理(50 ng/mL,15 分钟;+)的血清饥饿 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 37

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb(上)或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695(下),对经 λ 磷酸酶或 TPA #4174 处理(如图)的 293 NIH/3T3 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 38

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 39

对经 Calyculin A #9902(100nM,30 分钟)处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb,泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

Angiogenesis Antibody Sampler Kit: 图像 40

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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1 个试剂盒(7 x 20 µl)

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产品说明

Angiogenesis Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来研究 VEGFR2 的下游血管生成通路。试剂盒包含足量的一抗,每份一抗可进行两次蛋白质印迹。

特异性/敏感性

Angiogenesis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可识别其特定靶标蛋白的磷酸化形式。Phospho-FAK (Tyr397) (D20B1) Rabbit mAb 可能与过表达的酪氨酸磷酸化蛋白(EGFR),发生交叉反应。Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb 可能会与其他 Src 家族成员或过表达的磷酸化 RTK 发生交叉反应。Phospho-VEGFR2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb 可能会与 VEGFR1 发生交叉反应。

来源/纯化

使用与人 Akt 蛋白 Ser473、人 FAK 蛋白 Tyr397、人 p38 MAPK 蛋白 Thr180/Tyr182、人 p44 MAPK 蛋白 Thr202/Tyr204、人 PLCγ1 蛋白 Ser1248、人 Src 蛋白 Tyr416 和人 VEGFR2 蛋白 Tyr1175 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生兔单克隆抗体。

背景

血管内皮生长因子受体 2 (VEGFR2, KDR, Flk-1) 是内皮细胞中 VEGF 诱导的信号转导的主要受体。结合配体时,VEGFR2 自磷酸化并被激活 (1)。VEGFR2 信号转导是体内血管生成所必需的 (2-4)。受体激活会导致接头蛋白快速募集,包括 Shc、GRB2、PI3 激酶、NCK 以及蛋白酪氨酸磷酸酶 SHP-1 和 SHP-2 (5)。VEGFR2 在 Tyr1212 位点的磷酸化为 GRB2 结合提供一个停泊位点,在 Tyr1175 的磷酸化会导致结合 PI3 激酶的 p85 亚基和 PLCγ (1,5,6)。VEGFR2 在血管生成期间激活导致通过多个下游激酶信号转导通路进行信号转导,包括 Akt、Src、FAK、p38 和 Erk1/2 (2,7)。

  1. Meyer, M. et al. (1999) EMBO J 18, 363-74.
  2. Karkkainen, M.J. and Petrova, T.V. (2000) Oncogene 19, 5598-605.
  3. Rahimi, N. et al. (2000) J Biol Chem 275, 16986-92.
  4. Claesson-Welsh, L. (2003) Biochem Soc Trans 31, 20-4.
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  6. Takahashi, T. et al. (2001) EMBO J 20, 2768-78.
  7. Le Boeuf F et al. (2004) J Biol Chem 279, 39175–85

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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