反应性 | H Mk |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 44 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:200 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用 Protein A agarose beads 对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链产生的遮盖作用 (~50 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb (#3677) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:409
ALKBH1 Antibody 可检测 ALKBH1 总蛋白的内源水平。
人, 猴
使用与人 ALKBH1 蛋白中羧基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用肽亲和力色谱对抗体进行纯化。
AlkB 是一种氧化脱烷烃 DNA 修复酶,它首先在大肠杆菌中被发现 (1-5)。哺乳动物中有 9 个 AlkB 同源物,前 8 个命名为 ALKBH1-ALKBH8,第九个为 FTO(脂肪质量和肥胖相关蛋白)(6)。ALKBH1 与大肠杆菌 AlkB 有最高的序列一致性,它是一种 Fe(II) 和 2-氧化戊二酸依赖性双加氧酶,作用于 DNA 和 tRNA 等核酸并执行各种酶功能 (6-7)。与其他 AlkB 蛋白相似,ALKBH1 能够修复含 3-甲基胞嘧啶 (m3C) 的烷基化单链 DNA 和 RNA,尽管活性较低 (8)。也许更重要的是,它经证实还能催化 tRNAs 上 N1-甲基腺苷的去甲基化,从而调节翻译 (9)。ALKBH1 也在线粒体中起到作用,它检测并氧化线粒体 tRNAMet 上的 5-甲基胞嘧啶 (m5C),以生成 5-甲酰基胞嘧啶,从而增强线粒体翻译 (10)。有趣的是,ALKBH1 经证实还具有无嘌呤/无嘧啶 (AP) 裂解酶活性,可在无碱基位点裂解单链和双联 DNA,对有两个无碱基位点的双链 DNA 亲和力最大 (11)。最后,ALKBH1 被报告有 N(6)-甲基腺嘌呤 (6mA) 去甲基酶活性,表明它在表观遗传调节中起着作用 (12-13)。但另一项研究无法在同时使用生物化学测定法和敲除小鼠时证明 ALKBH1 6mA 去甲基酶有确切的活性 (9),因此这种酶功能仍然存在争议。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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