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8336
ALK Activation Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

ALK Activation Antibody Sampler Kit #8336

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ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 1

使用 Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAb(A 和 B)和 ALK Antibody(C 和 D),对 Sup-M2 细胞裂解物进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸化特异性在蛋白质印迹实验转移后,用牛小肠磷酸酶 (CIP)(B 和 D)处理的膜进行确定。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 2

使用 Phospho-Jak3 (Tyr980/981) (D44E3) Rabbit mAb(上)或 Jak3 Antibody #3775(下),对未经处理或经 Human Interleukin-2 (hIL-2) #8907 处理(10 ng/ml,15 分钟)的 NK-92 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 3

使用 Phospho-Jak2 (Tyr1007) (D15E2) Rabbit mAb(上)或总的 Jak2 (D2E12) Rabbit mAb #3230(下),对未经处理或经红细胞生成素处理(EPO;3 单位/ml;5 分钟)的 UT-7 细胞、未经处理的 HEL 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。HEL 细胞存在 Jak2 V617F 激活突变。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 4

使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后,用 IL-6(100 ng/ml;30 分钟)处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质,在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 后,进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 IRF1 内结合,IRF1 是 Phospho-Sata3 的一种已知靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。如需了解其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 5

使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb 对未经处理(蓝色)或 GM-CSF 处理(绿色)的 TF-1 细胞进行流式细胞分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 6

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® 兔单克隆抗体(实线)或浓度匹配的兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900(虚线)对经 U0126(10 µM,2 小时;绿色)处理或经 TPA #4174 (200 nM,30 分钟;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 7

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经(绿色)或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903(50 μM、1 μM 和 10 μM,2 小时;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 8

使用 Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb(上)或 Src (36D10) Rabbit mAb #2109(下),对血清饥饿或经人 Platelet-Derived Growth Factor BB hPDGF-BB #8912 处理(100 ng/ml,15 分钟)的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 9

使用 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线),对未经处理(蓝色)或已经 mPDGFbb(200ng/ml,15 分钟;绿色)处理的 NIH/3T3 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 10

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 11

使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对饥饿过夜后,用 IL-6(100 ng/ml;30 分钟)处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质,在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量,用染色质投入总量(相当于 1)相对应的信号进行表示。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 12

使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) XP® (D47E7) Rabbit mAb (绿色)和 Pan-Keratin (C11) Mouse mAb #4545(红色),对经 EGF 处理(左)或未经处理(右)的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 13

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(绿色)和 S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb #2317(红色),对未经处理(上)或经 λ 磷酸酶处理(下)的果蝇卵泡进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 14

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(绿色),对经 LY294002 处理(左)或经胰岛素处理(右)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084(DNA 荧光染料)。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 15

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb(泳道 3),对经 hEGF #8916 刺激的 A-431 细胞提取物 phospho-PLCγ1 (Tyr783) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 16

使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经(蓝色)或已经 IFNα(50 ng/ml,15 分钟;绿色)处理的 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 17

使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb,对未经处理或经红细胞生成素处理(EPO;3 单位/ml,5 分钟)的 UT-7 细胞、未经处理或经 Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor #8922 处理(hGM-CSF;100 ng/ml,10 分钟)的 TF-1 细胞、未经处理或经 Human Interleukin-2 #8907 处理(hIL-2;100 ng/ml,10 分钟)的 NK-92 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 18

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(绿色)和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色),对饥饿过夜,然后用 U0126 #9903(10 uM,2 小时;左)或 PDBu (Phorbol 12,13-Dibutyrate) #12808(100 nM,15 分钟;右)处理的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 19

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(左)或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559(右),对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意:PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 20

使用 Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对未经处理 (-) 或经 hPDGF-BB #8912 刺激(5分钟;+)的 NIH/3T3 细胞、未经处理 (-) 或经 hEGF #8916 刺激(5 分钟;+)的 A-431 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 21

对 IFN-α 处理(左)或未经处理(右)Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析,用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb(绿色)标记。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 22

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 23

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060,对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112(左)和 TBST/5% Normal Goat Serum(右)对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 24

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺神经内分泌癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 25

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb,对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 26

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 27

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 28

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb on SignalSlide™ Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) IHC Controls #8103,(对 U0126 #9903(左)或 TPA # 4174(右)处理的石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞)进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 29

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左)或经 LY294002 处理(右)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 30

使用 Phosho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Apc (min/+) 小鼠肠道进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 31

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 和 p44/42 MAPK (Erk1/2) (3A7) Mouse mAb #9107,对未经处理或经 U0126 #9903(10 µM,1 小时)或 TPA #4174(200 nM,10 分钟)处理的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 32

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 33

使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb,对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人乳腺癌(尤其是内皮细胞)进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 34

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb(上)或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695(下),对经 λ 磷酸酶或 TPA #4174 处理(如图)的 293 NIH/3T3 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 35

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。(组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠)

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 36

使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析,显示出胞核定位。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 37

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 38

使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb on SignalSlide® HeLa -/+ IFNa IHC Controls #55861(对未经处理(左)或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 处理(右)的石蜡包埋的 Hela 细胞沉淀物)进行免疫组织化学分析。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 39

对经 Calyculin A #9902(100nM,30 分钟)处理的 Jurkat 提取物中的磷酸化 Akt (Ser473) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb,泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP3® Isotype Control #3900。使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 40

使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb,对 IFN-α 处理的 Jurkat 细胞、Hela 细胞(左)、经 EGF 处理的 A431 细胞(右)提取物进行蛋白质印迹分析。注意,抗体可检测 A431 的基础磷酸化 Stat3。

ALK Activation Antibody Sampler Kit: 图像 41

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

购买 # 8336T
产品货号 规格 价格 库存
8336T
1 个试剂盒(9 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAb 3348 20 µl
  • WB
H 80 (NPM-ALK) 220 (ALK) 兔 IgG
Phospho-Jak3 (Tyr980/981) (D44E3) Rabbit mAb 5031 20 µl
  • WB
H M 115 兔 IgG
Phospho-Jak2 (Tyr1007) (D15E2) Rabbit mAb 4406 20 µl
  • WB
H M 125 兔 IgG
Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 9145 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
  • ChIP
H M R Mk 79, 86 兔 IgG
Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb 4322 20 µl
  • WB
  • IF
  • F
H M 90 兔 IgG
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 4370 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Hm Mk Mi Dm Z B Dg Pg Sc 44, 42 兔 IgG
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 4060 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Hm Mk Dm Z B 60 兔 IgG
Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb 6943 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb 14008 20 µl
  • WB
  • IP
  • F
H M 155 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

ALK Activation Antibody Sampler Kit 提供一种经济的方法,检测 ALK 通路多个成员的激活状态,包括磷酸化的 ALK、Jak2、Jak3、Stat3、Stat5、PLCγ1、Akt、Src 和 p44/42 MAPK。该试剂盒含有足量的一抗,每种一抗可进行 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

ALK Activation Antibody Sampler Kit 的每种抗体均能检测各自特定靶标的磷酸化形式。Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAb 可能会与 EGFR 等其他激活的蛋白酪氨酸激酶发生交叉反应。Phospho-Jak2 (Tyr1007) (D15E2) Rabbit mAb 可能会与磷酸化的 Jak3 和 Tyk2 发生交叉反应。Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb 可能会与过表达的磷酸化 RTKs 发生交叉反应。

来源/纯化

使用与人 Akt Tyr1586、人 Jak2 蛋白 Tyr1007、人和小鼠 Jak3 Tyr980/981、小鼠 Stat3 蛋白 Tyr705、人 Stat5a Tyr694、人 p44 MAP 激酶 Thr202/Tyr204、人 Akt Ser473、人 Src Tyr416 或人 PLCγ1 蛋白 Tyr783 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生兔单克隆抗体。

背景

间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 是多效生长因子 (PTN) 的一种酪氨酸激酶受体,PTN 是与胚胎脑发育有关的生长因子 (1-3)。在表达 ALK 的细胞中,PTN 诱导 ALK 和下游效因子 IRS-1、Shc、PLCγ 和 PI3 激酶发生磷酸化 (1)。ALK 最初被发现是转位产生的一种核磷蛋白 (NPM)-ALK 融合蛋白 (4)。研究人员发现,NPM-ALK 融合蛋白是一种与间变性淋巴瘤相关的结构激活且会致癌的酪氨酸激酶 (4)。研究文献表明,NPM-ALK 激活 PLCγ 可能是有丝分裂活性的关键步骤,可能与间变性淋巴瘤的发病机理有关 (5)。

针对非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系的研究文献,描述了与 ALK 和棘皮动物微管相关蛋白样 4 (EML4) 的不同的 ALK 致癌融合蛋白,并且在某些肺腺癌病例中存在相应融合转录蛋白。微管相关蛋白 EML4 的短氨基末端区域能融合到 ALK 的激酶结构域 (6-8)。

  1. Stoica, G.E. et al. (2001) J Biol Chem 276, 16772-9.
  2. Iwahara, T. et al. (1997) Oncogene 14, 439-49.
  3. Morris, S.W. et al. (1997) Oncogene 14, 2175-88.
  4. Morris, S.W. et al. (1994) Science 263, 1281-4.
  5. Bai, R.Y. et al. (1998) Mol Cell Biol 18, 6951-61.
  6. Rikova, K. et al. (2007) Cell 131, 1190-203.
  7. Takeuchi, K. et al. (2008) Clin Cancer Res 14, 6618-24.
  8. Soda, M. et al. (2007) Nature 448, 561-6.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
该试剂盒中的选择抗体经 Chemicon International, Inc.(美国专利号 5,658,791)许可销售。
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