反应性 | H |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | 68, 90 |
来源 | 兔 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫沉淀 | 1:50 |
保存在 10mM sodium HEPES(pH 为 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。
要进行蛋白质印迹法分析,在 4°C 下,将膜与稀释的一抗放在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中一起孵育,轻晃孵育一整夜。
注意:请参阅一抗产品网页了解建议使用的抗体稀释度。
从样品制备至检测,蛋白质印迹法需要用到的试剂在一个套装试剂盒中提供:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#13953,5 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布于 2005 年 6 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
本实验步骤适用于使用蛋白 A 磁珠分离法对天然蛋白进行免疫沉淀,以进行蛋白质免疫印迹或激酶活性分析。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
10X 细胞裂解缓冲液:(#9803) 要制备 10 ml 的 1X 细胞裂解缓冲液,将 1 ml 细胞裂解缓冲液添加至 9 ml dH2O,并混合。
注意:使用前,请立即添加 1 mM PMSF (#8553)。
强烈建议进行细胞裂解物预清除步骤,以减少结合 Protein A Magnetic beads 的非特异性蛋白。为检测样品和同型对照预澄清足够裂解物。
重要提示:使用前,预先洗涤 #73778 磁珠:
一旦溶液变澄清,便小心清除缓冲液。添加 500 μl 1X 细胞裂解缓冲液到磁珠沉淀物中,稍微涡旋以洗涤珠子。将试管放回磁分离架。一旦溶液变澄清,便清除缓冲液。再次进行洗涤步骤。
重要提示:最佳裂解物浓度将取决于目的蛋白的表达水平。建议起始浓度为 250 μg/ml-1.0 mg/ml。
重要提示:强烈建议使用相应的同型对照,以便在你的一抗免疫沉淀中显示特异性结合。使用 Normal Rabbit IgG #2729、Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 和 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 分别进行兔多克隆一抗、兔单克隆一抗和小鼠单克隆一抗的对照检测。同型对照的浓度应匹配,并与一抗样品同时进行。
继续下述其中一项的具体步骤。
注意:为了最大限度减少变性 IgG 重链 (~50 kDa) 产生的遮盖作用,我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb (#45262) 或 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP 缀合物 #5127)。为了最大限度减少变性 IgG 轻链产生的遮盖作用 (~25 kDa),我们建议使用 Mouse Anti-Rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (#3678)(或 HRP conjugate #5127)
发布于 2008 年 12 月
修订于 2018 年 4 月
实验步骤编号:410
ADAM10 Antibody 可检测 ADAM10 总蛋白(包括活性、成熟68 kDa 蛋白和 90 kDa 前体链)的内源水平。该抗体也可以检测未知来源的35 kDa 蛋白。
人
使用与人 ADAM10 蛋白羧基末端附近残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白质 A 和肽亲和色谱对抗体进行纯化。
多结构域膜蛋白的 ADAM(解聚素和金属蛋白酶)家族成员通过脱落细胞表面蛋白(例如细胞因子和生长因子)来影响细胞信号转导和黏附。该过程影响细胞外基质 (ECM) 的黏附和重构。在大多数 ADAM 家族蛋白中发现的保守结构域都包括一个前结构域、一个有锌依赖性的金属蛋白酶结构域、一个解聚素结构域、一个处羧基末端的富含半胱氨酸的结构域、一个 EGF 类序列和一个短胞质尾 (1,2)。
ADAM 金属肽酶结构域 10 (ADAM10) 是一种质膜蛋白酶,可裂解具有受控膜内蛋白水解 (RIP) 靶向的膜结合蛋白。ADAM10 前结构域作为分子伴侣可稳定成熟 ADAM 的蛋白质折叠,并通过抑制 ADAM10 蛋白酶活性来防止靶标蛋白脱落 (3,4)。成熟 ADAM10 是主要的α 分泌酶,负责 Notch、APP、cadherins 和 prion 蛋白的剪切(5-7)。ADAM10 蛋白剪切受体酪氨酸激酶和与其相关的配体,并通过相关的信号转导通路来发挥各种调节功能 (8)。对基因敲除小鼠的研究证实,ADAM10 缺失会导致皮层形成、淋巴细胞发育和心血管发育上的缺陷 (9-11)。ADAM10 蛋白表达增加与许多类型的癌症(即:胃癌、肝细胞癌和脑胶质瘤)进展有关,原因是癌细胞迁移、转移和侵犯增强 (12-14) 。相应的 ADAM10基因突变导致罕见的常染色体显性色素沉着病,也称为 Kitamura 网状肢端色素沉着症 (15)。
探索与本品相关的通路 + 蛋白。
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