查看特别推荐 >>
60395
Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel
流式细胞术试剂盒与试剂
检测试剂盒

Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel #60395

引用 (0)
Flow Cytometry Image 1: Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel
使用 PD-1 (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #2975(虚线)对固定和透化的 NIH-3T3 细胞(蓝色,阴性)和 EL4 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 2: Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742(虚线)作为对照,使用 TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjugate)(实线)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 3: Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (violetFluor 450 Conjugate) #52572(虚线)作为对照,使用 CD3 (17A2) Rat mAb (violetFluor 450 Conjugate)(实线)对活性小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 4: Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的大鼠 (LTF-2) 单克隆抗体 IgG2b 同型对照 (PE-Cy7® 偶联物) #43426(虚线)作为对照,使用 CD8α (2.43) 大鼠单克隆抗体 (PE-Cy7® 偶联物)(实线)对活的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 5: Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel
使用 Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(顶排)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #2985(底排)对未经(左栏)或已经抗 CD3 + 抗 CD28(10 μg/ml,72 小时;右栏)处理且用 CD8 Antibody 共染色的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 60395S
目录# 规格 价格 库存
60395S
1 个试剂盒(50 次检测)

重要订购明细

客户订购明细: 产品订购后即配制。请为产品加工时间预留 3 个工作日。

实验步骤

打印

查看 > 收起 >

直接偶联抗体的流式细胞术 Triton™ X-100 透化实验步骤

A. 溶液与试剂

本实验步骤中所需的所有试剂均可与我公司的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Triton™ X-100) #51995 一并高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 4% 甲醛,无甲醇 (#47746)
  3. 细胞透化缓冲液:购买即用型 (#39487) ,或要配制 10 ml,请添加 30 µl Triton™ X-100 到 10 ml 抗体稀释液。4°C 保存。
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释液 (#13616),或要配制 100 ml,请在 100 ml 1X PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998)。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 固定与透化

:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。

:如果表位遭甲醛和/或 Triton™ X-100 破坏,则可在固定前添加靶向 CD 标志物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。混匀以解离沉淀物并防止各个细胞交联。
  3. 室温 (20-25°C) 固定 15 分钟。
  4. 通过离心用过量 1X PBS 洗涤。将上清液弃于合适的废液缸中。
  5. 在每一百万个细胞约 100 μl 细胞透化缓冲液中重悬细胞。
  6. 在室温孵育 10 分钟。
  7. 继续进行染色或将细胞在 PBS 中 -4°C 保存过夜。

C. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次检测用 5x105 至 1x106 个细胞)。
  2. 将细胞离心,弃去清液。
  3. 在 100 µl 稀释的抗体偶联物中重悬细胞,抗体偶联物在抗体稀释缓冲液中按建议的或如通过滴定确定的稀释度配制。
  4. 室温 (20-25°C) 孵育 1 小时。避光。
  5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 1X PBS 中重悬细胞,在流式细胞分析仪上分析。

发布​时间 2017 年 1 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:1344

产品说明

Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel 可用于鉴定祖细胞耗竭型 CD8+ T 细胞及其具有效应子潜能的分化 T 细胞。

依据 CD3 和 CD8α 的共表达鉴定细胞毒性 T 细胞。在这些细胞中,耗竭型祖细胞为 TCF1+PD-1+ 细胞,多呈颗粒酶 B-;具有效应子潜能的分化细胞为 TCF1-PD-1+,多呈颗粒酶 B+。应答于免疫治疗时,这些 TCF1+PD-1+CD8+ 祖细胞可以扩充并分化为 TCF1-PD-1+CD8+ 效应细胞。

产品使用信息

该试剂盒中的所有抗体均兼容于 Intracellular Flow Cytometry Kit (TritonTM X-100) #51995,并可在单一染色混合物中用于固定和透化的细胞上。在固定和抗体孵育之前,我们建议添加可固定的活力指示染料(例如 Ghost Dye™ Violet 510 Viability Dye),以便鉴定死细胞并从分析中排除之。

该组合可结合肽-MHC 四聚体染色来鉴定抗原特异性细胞。通常对活细胞进行四聚体染色。如果需要四聚体染色,我们建议参照对该组合推荐的实验步骤,在活细胞染色时比较试剂的活性。如果两种状况之间无显著差异,则四聚体可以纳入抗体组合染色混合物。如果固定和透化之后活性显著丧失,则应在固定和透化之前对活细胞进行四聚体染色。

观察祖细胞耗竭型 CD8+ T 细胞的门控策略:
如果使用了可固定的活力指示染料,则首先对活细胞设门。接下来,基于前向散射和侧向散射对淋巴细胞设门。细胞毒性 T 细胞是淋巴细胞门内部的 CD3+CD8+ 细胞。接下来,观察细胞毒性 T 细胞上的 TCF1 和 PD-1 表达。TCF1+PD-1+ 细胞毒性 T 细胞是耗竭型祖细胞,且预计大多呈颗粒酶 B 表达阴性。TCF1-PD-1+ 细胞毒性 T 细胞是具有效应子潜能的分化细胞,且预计大多呈颗粒酶 B 表达阳性。

保存

PD-1 (Intracellular Domain) (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)、TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjugate) 和 Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 在 PBS (pH 7.2)、小于 0.1% 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中供应。CD8α (2.43) Rat mAb (PE-Cy7® Conjugate) 和 CD3 (17A2) Rat mAb (violetFluor™ 450 Conjugate) 在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3、0.1% 明胶(pH 7.2)中供应。

储存于 4oC。切勿分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

在推荐温度保存时,该试剂盒中的所有组分均随外包装标签上印刷的日期保持稳定。请参阅产品标签、数据表或网页,以了解每个单独组分具体的“最佳使用日期”。

特异性/灵敏度

Mouse Progenitor Exhausted CD8+ T Cell Markers Flow Cytometry Panel 中的每种抗体均可检测其内源水平的靶标蛋白。CD8α (2.43) Rat mAb (PE-Cy7® Conjugate) 和 CD3 (17A2) Rat mAb (violetFluor™ 450 Conjugate) 可检测胞外结构域内部的表位。PD-1 (Intracellular Domain) (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)、TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjugate) 和 Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 可检测胞内结构域内部的表位。

物种反应性:

小鼠

来源/纯化

通过亲和层析从组织培养上清液中纯化单克隆抗体。纯化的抗体在最佳条件下偶联,未反应的染料从制剂中去除。

有限使用

除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意,否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受,否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。

产品用“仅供研究使用”或类似标示声明标示,并且尚未经 FDA 或其他国外或国内监管实体出于任何目的批准、准许或许可。客户不得出于任何诊断或治疗目的或以任何与产品标示声明相冲突的方式使用任何产品。CST 销售或许可的产品提供给作为最终用户的客户,且仅用于研究和开发用途。出于诊断、预防或治疗目的任何产品使用或出于转售(单独或作为成分)或其他商业目的的任何产品购买都要求来自 CST 的单独许可。客户 (a) 不得向任何第三方出售、许可、出借、捐赠或另行转让或提供任何本公司产品,无论单独或联合其他材料方式,或使用本公司产品制造任何商业产品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反编译、反汇编或另行尝试发现本公司产品的底层结构或技术,或出于开发与 CST 产品或服务竞争的任何产品或服务的目的使用本公司产品,(c) 不得从本公司产品改变或移除任何商标、商品名称、徽标、专利或版权声明或标记,(d) 仅应根据 CST 产品销售条款和任何适用文档使用本公司产品,以及 (e) 应就客户联系本公司产品所用的任何第三方产品或服务而言遵守任何许可、服务条款或类似协议。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
第 7,429,487 号美国专利,外国对应物,以及由此而来的儿童专利。
所有其他商标均属各自所有者专有。访问我们的商标信息页面。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink