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62447
Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
流式细胞术试剂盒与试剂
检测试剂盒

Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel #62447

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Flow Cytometry Image 1: Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Rat Isotype Control (PerCP-Cy5.5® Conjugate)(左图)作为对照,使用 IL2-Rα/CD25 (PC61.5) Rat mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)(右图)和共染色的 CD4 (RM4-5) Rat mAb (violetFluor 450 Conjugate) #92599 对活性小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 2: Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
使用 CD69 (H1.2F3) Hamster Mab (FITC Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Armenian Hamster Isotype Control (FITC Conjugate)(虚线)进行了活小鼠脾细胞的流式细胞分析,未经(蓝色)或已经过 Concanavalin A (3 µg/ml,过夜;绿色)处理。
Flow Cytometry Image 3: Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的大鼠 (LTF-2) 单克隆抗体 IgG2b 同型对照 (PE-Cy7® 偶联物) #43426(虚线)作为对照,使用 CD8α (2.43) 大鼠单克隆抗体 (PE-Cy7® 偶联物)(实线)对活的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 4: Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
与浓度匹配的 Rat Isotype Control (violetFluor 450 Conjugate)(虚线)比较,使用 CD4 (RM4-5) Rat mAb (violetFluor 450 Conjugate)(实线)对活的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 5: Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的大鼠 (LTF-2) 单克隆抗体 IgG2b 同型对照 (PE 偶联物) #27426(虚线)作为对照,使用 CD3 (17A2) 大鼠单克隆抗体 (PE 偶联物)(实线)对活的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 62447S
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62447S
1 个试剂盒(200 次检测)

重要订购明细

客户订购明细: 产品订购后即配制。请为产品加工时间预留 3 个工作日。

实验步骤

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流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

产品说明

Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel 可用于识别活化的小鼠 T 细胞。

T 细胞依据 CD3 的表达来鉴定。常规的 T 细胞有两个主要亚群:表达 CD4 的辅助性 T 细胞和表达 CD8 的细胞毒性 T 细胞。通过 T 细胞受体刺激后,T 细胞上调 CD69 和 IL-2Rα/CD25 的表达。调节性 T 细胞组成型表达 IL-2Rα/CD25。

产品使用信息

该试剂盒中的所有抗体均与流式细胞术、直接偶联抗体的活细胞实验方案兼容,并可用于单一染色混合物中。在抗体染色后并且在流式细胞仪上采集之前,我们建议添加一种膜不可渗透的活力指示染料(例如碘化丙啶或 7-AAD),以便从分析中鉴定并排除死细胞。

识别活化 T 细胞的门控策略:
如果使用碘化丙啶或 7-AAD,首先对活细胞设门。接下来,基于前向散射和侧向散射对淋巴细胞设门。辅助性 T 细胞是淋巴细胞门内部的 CD3+CD4+ 细胞。活化的辅助 T 细胞对 CD69 和/或 IL-2Rα/CD25 的表达呈阳性。调节性 T 细胞也可以表达 IL-2Rα/CD25。细胞毒性 T 细胞是淋巴细胞门内部的 CD3+CD8+ 细胞。活化的细胞毒性 T 细胞对 CD69 和/或 IL-2Rα/CD25 的表达呈阳性。

保存

抗体以 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3、 0.1% 明胶,pH7.2。储存于 4oC。切勿分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

在推荐温度保存时,该试剂盒中的所有组分均随外包装标签上印刷的日期保持稳定。请参阅产品标签、数据表或网页,以了解每个单独组分具体的“最佳使用日期”。

特异性/灵敏度

Mouse Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel 中的每种抗体均可检测其靶蛋白的内源水平。CD3 (17A2) Rat mAb (PE Conjugate) 可识别 CD3ε、CD3γ 和 CD3δ 蛋白并检测细胞外结构域内的表位。CD4 (RM4-5) Rat mAb (violetFluor™ 450 Conjugate)、CD8α (2.43) Rat mAb (PE-Cy7® Conjugate)、IL2-Rα/CD25 (PC61.5) Rat mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate) 和 CD69 (H1.2F3) Hamster mAb (FITC Conjugate) 可检测细胞外结构域内的表位。

物种反应性:

小鼠

来源/纯化

通过亲和层析从组织培养上清液中纯化单克隆抗体。纯化的抗体在最佳条件下偶联,未反应的染料从制剂中去除。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

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