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83586
Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel
流式细胞术试剂盒与试剂
检测试剂盒

Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel #83586

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Flow Cytometry Image 1: Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (APC Conjugate) #49083(左图)作为对照,使用 NCAM1 (CD56) (MY31) Mouse mAb (APC Conjugate)(右图)和共染色的 CD3 (UCHT1) Mouse mAb (FITC Conjugate) #86774 对活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 2: Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (violetFluor 450 Conjugate) #40282(虚线)作为对照,使用 CD3 (UCHT1) Mouse mAb (violetFluor 450 Conjugate)(实线)对活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 3: Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (PE Conjugate) #63630(左图)作为对照,使用 CD16 (3G8) Mouse mAb (PE Conjugate) 和共染色的 NCAM1 (CD56) (MY31) Mouse mAb (APC Conjugate) #51997(右图)对活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 4: Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (FITC Conjugate) #97146(虚线)作为对照,使用 CD45 (HI30) Mouse mAb (FITC Conjugate)(实线)对活的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 83586S
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83586S
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重要订购明细

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实验步骤

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流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

产品说明

Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel 可用于检测人类自然杀伤 (NK) 细胞。

人自然杀伤细胞是 CD45+CD3-CD56+。CD16 表达高的大亚群是成熟的细胞毒性自然杀伤细胞,而 CD16 表达低的那些是未成熟的前体和细胞因子生产者。

产品使用信息

该试剂盒中的所有抗体均与流式细胞术、直接偶联抗体的活细胞实验方案兼容,并可用于单一染色混合物中。在抗体染色后和流式细胞仪采集之前,我们建议添加碘化丙啶或 7-AAD,以便从分析中识别和排除死细胞。

鉴定人类自然杀伤细胞的设门策略:
如果使用碘化丙啶或 7-AAD,首先对活细胞设门。接下来,根据 CD45 表达进行设门,然后根据 CD45+ 部分的前向角和侧向角对淋巴细胞进行设门。NK 细胞是 CD3-CD56+,可以进一步分析这些细胞的 CD16 表达。

保存

抗体以 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3、 0.1% 明胶,pH7.2。储存于 4oC。切勿分装抗体,避光保存,切勿冷冻。


在推荐温度保存时,该试剂盒中的所有组分均随外包装标签上印刷的日期保持稳定。请参阅产品标签、说明书或网页,以了解每个单独组分的特定“最佳使用日期”。

特异性/灵敏度

Human Natural Killer Cell Markers Flow Cytometry Panel 中的每种抗体检测其靶蛋白的内源水平和细胞外结构域内的表位。

物种反应性:

来源/纯化

通过亲和层析从组织培养上清液中纯化单克隆抗体。纯化的抗体在最佳条件下偶联,未反应的染料从制剂中去除。

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

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