查看特别推荐 >>
23428
Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
流式细胞术试剂盒与试剂
检测试剂盒

Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel #23428

引用 (0)
Flow Cytometry Image 1: Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
使用 CD69 (FN50) Mouse mAb (PE-Cy7® Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (PE-Cy7® Conjugate) #79339(虚线)对未经(蓝色)或已经 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174(0.081 uM,5 小时)和 Ionomycin, Calcium Salt #9995(1.34 uM,5 小时;绿色)处理的活的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 2: Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (APC Conjugate) #49083 作为对照,使用 IL2-Rα/CD25 (BC96) Mouse mAb (APC Conjugate)(右图)和共染色的 CD4 (RPA-T4) Mouse mAb (FITC Conjugate) #48705 对活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 3: Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (FITC Conjugate) #97146(虚线)作为对照,使用 CD8α (RPA-T8) Mouse mAb (FITC Conjugate)(实线)对活的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 4: Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
与浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (violetFluor 450 Conjugate) #40282(虚线)比较,使用 CD4 (RPA-T4) Mouse mAb (violetFluor 450 Conjugate)(实线)对活的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
Flow Cytometry Image 5: Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel
与浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (PE Conjugate) #63630(虚线)比较,使用 CD3 (UCHT1) Mouse mAb (PE Conjugate)(实线)对活的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 23428S
目录# 规格 价格 库存
23428S
1 个试剂盒(100 次检测)

重要订购明细

客户订购明细: 产品订购后即配制。请为产品加工时间预留 3 个工作日。

实验步骤

打印

查看 > 收起 >

流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

产品说明

Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel 可用于鉴定活化的人 T 细胞。

T 细胞依据 CD3 的表达来鉴定。常规的 T 细胞有两个主要亚群:表达 CD4 的辅助性 T 细胞和表达 CD8 的细胞毒性 T 细胞。通过 T 细胞受体刺激后,T 细胞上调 CD69 和 IL-2Rα/CD25 的表达。调节性 T 细胞组成型表达 IL-2Rα/CD25。

产品使用信息

该试剂盒中的所有抗体均与流式细胞术、直接偶联抗体的活细胞实验方案兼容,并可用于单一染色混合物中。在抗体染色后和流式细胞仪采集之前,我们建议添加碘化丙啶或 7-AAD,以便从分析中识别和排除死细胞。

识别活化 T 细胞的门控策略:
如果使用碘化丙啶或 7-AAD,首先对活细胞设门。接下来,基于前向散射和侧向散射对淋巴细胞设门。辅助性 T 细胞是淋巴细胞门内部的 CD3+CD4+ 细胞。活化的辅助 T 细胞对 CD69 和/或 IL-2Rα/CD25 的表达呈阳性。调节性 T 细胞也可以表达 IL-2Rα/CD25。细胞毒性 T 细胞是淋巴细胞门内部的 CD3+CD8+ 细胞。活化的细胞毒性 T 细胞对 CD69 和/或 IL-2Rα/CD25 的表达呈阳性。

保存

抗体以 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3、 0.1% 明胶,pH7.2。储存于 4oC。切勿分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

在推荐温度保存时,该试剂盒中的所有组分均随外包装标签上印刷的日期保持稳定。请参阅产品标签、说明书或网页,以了解每个单独组分的特定“最佳使用日期”。

特异性/灵敏度

Human Activated T Cell Markers Flow Cytometry Panel 中的每种抗体均可检测其靶蛋白的内源水平。CD3 (UCHT1) Mouse mAb (PE Conjugate)、CD4 (RPA-T4) Mouse mAb (violetFluor™ 450 Conjugate)、CD8α (RPA-T8) Mouse mAb (FITC Conjugate)、IL2-Rα/CD25 (BC96) Mouse mAb (APC Conjugate) 和 CD69 (FN50) Mouse mAb (PE-Cy7® Conjugate) 可检测细胞外结构域内的表位。

物种反应性:

来源/纯化

通过亲和层析从组织培养上清液中纯化单克隆抗体。纯化的抗体在最佳条件下偶联,未反应的染料从制剂中去除。

有限使用

除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意,否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受,否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。

产品用“仅供研究使用”或类似标示声明标示,并且尚未经 FDA 或其他国外或国内监管实体出于任何目的批准、准许或许可。客户不得出于任何诊断或治疗目的或以任何与产品标示声明相冲突的方式使用任何产品。CST 销售或许可的产品提供给作为最终用户的客户,且仅用于研究和开发用途。出于诊断、预防或治疗目的任何产品使用或出于转售(单独或作为成分)或其他商业目的的任何产品购买都要求来自 CST 的单独许可。客户 (a) 不得向任何第三方出售、许可、出借、捐赠或另行转让或提供任何本公司产品,无论单独或联合其他材料方式,或使用本公司产品制造任何商业产品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反编译、反汇编或另行尝试发现本公司产品的底层结构或技术,或出于开发与 CST 产品或服务竞争的任何产品或服务的目的使用本公司产品,(c) 不得从本公司产品改变或移除任何商标、商品名称、徽标、专利或版权声明或标记,(d) 仅应根据 CST 产品销售条款和任何适用文档使用本公司产品,以及 (e) 应就客户联系本公司产品所用的任何第三方产品或服务而言遵守任何许可、服务条款或类似协议。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Cy 和 CyDye 是 GE Healthcare 的注册商标。
所有其他商标均属各自所有者专有。访问我们的商标信息页面。
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink