p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts #34499

产品使用信息

使用前请先煮沸 3 分钟。每条泳道上样 10 µl 的磷酸化和非磷酸化 p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts。

保存

储存于 -20°C 的温度下。保存在SDS上样缓冲液中：含 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8，25°C)、2 % w/v SDS、10 % 甘油、50 mM DTT、0.01% w/v 溴酚蓝或酚红。

产品说明

非磷酸化 p70 S6 Kinase Control Cell Extracts：MCF7 细胞的总细胞提取物，血清饥饿过夜，用作阴性对照。在 SDS 样品缓冲液中配备该提取物。

磷酸化 p70 S6 Kinase Control Cell Extracts：经血清饥饿过夜并用 100 ng/ml hIGF-1 #8917 处理 10 分钟的 MCF7 细胞的总细胞提取物用作阳性对照。在 SDS 样品缓冲液中配备该提取物。

背景

p70 S6 激酶是一种丝裂原激活的 Ser/Thr 蛋白激酶，这种激酶是细胞生长和 G1 细胞周期进程所必需的 (1,2)。p70 S6 激酶使 40S 核糖体亚基的 S6 蛋白磷酸化，并参与 5’ 端多嘧啶区 mRNA 的翻译调控 (1)。第二同工型 p85 S6 激酶源于相同的基因，并且除了氨基末端处编码核定位信号的额外 23 个残基之外，与 p70 S6 酶相同 (1)。两种同工型都位于丝裂原激活信号转导通路（一个异于 Ras/MAP 激酶级联的通路）上的磷酸肌醇-3 激酶 (PI-3K) 和雷帕霉素靶标 FRAP/mTOR 下游 (1)。p70 S6 激酶活性受多个位于催化结构域、接头结构域和假底物结构域内部的磷酸化事件控制 (1)。催化结构域中 Thr229 和接头结构域中 Thr389 的磷酸化对激酶功能非常关键 (1)。但 Thr389 的磷酸化与体内 p70 激酶活性的关系最为紧密 (3)。磷酸肌醇-3 依赖性蛋白激酶 1 (PDK1) 对 Thr229 的作用需要 Thr389 先磷酸化 (4,5)。这个位点的磷酸化受到各种生长因子（如胰岛素、EGF 和 FGF）以及血清和一些 G 蛋白偶联受体配体刺激，而被 wortmannin、LY294002（PI-3K 抑制剂）和雷帕霉素（FRAP/mTOR 抑制剂）阻断 (1,6,7)。Ser411、Thr421 和 Thr424 位于假底物结构域的丝氨酸脯氨酸富集区 (1)。人们认为这些位点的磷酸化通过解除假底物抑制作用而激活 p70 S6 激酶 (1,2)。另一个对 LY294002 和雷帕霉素敏感的磷酸化位点 Ser371 是 mTOR 的一个体外底物，与部分抵抗雷帕霉素的 P70 S6 激酶突变体的活性很相关 (8)。

1. Pullen, N. and Thomas, G. (1997) FEBS Lett 410, 78-82.
2. Dufner, A. and Thomas, G. (1999) Exp Cell Res 253, 100-9.
3. Weng, Q.P. et al. (1998) J Biol Chem 273, 16621-9.
4. Pullen, N. et al. (1998) Science 279, 707-10.
5. Alessi, D.R. et al. (1998) Curr Biol 8, 69-81.
6. Polakiewicz, R.D. et al. (1998) J Biol Chem 273, 23534-41.
7. Fingar, D.C. et al. (2002) Genes Dev 16, 1472-87.
8. Saitoh, M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 20104-12.